加fiicoll分血时分出的血清培养细胞对细胞有影响吗？

wenwen1228

加ficoll分血时分出的上清血清会有ficoll残留吗？养细胞时再加入培养基中对细胞有影响吗？请高手指教，谢谢！

wenwen1228

还有，分离出的血清4℃可以保存多久？

ljs

好问题，问得好。现在手中没有数据库可用，明天回到单位，查文献，给你回答。you have my word.

henryjia

同问！

wujh1986

在你ficoll之前将血清分离出去就是了啊，然后再ficoll分离啊

ljs

1.血清可能会有ficoll残留，建议不能加入到细胞培养液中。理由是1）在ficoll加入血液时，通过离心，血细胞进入到ficoll，理论上整个液面上清是血清，中间是单个核细胞，沉淀是红细胞和粒细胞。但是实际操作中得到的血清，可能含有ficoll。因为ficoll与血浆可以溶在一起。如：液面受到震动，分离后血清的吸取等都容易吸取ficoll。这个方法得到的血清有很大的不稳定性，所以不要使用ficoll的血清。6 a- H/ F: n$ x% F6 n( M3 v+ m! _
2.建议：想得到血清需要先离心血液，在实际的操作中，血浆占血液体积的40%-45%，通过离心血浆再得到血清。

cheeray

先离心。。。。把血浆和细胞分开。。。

pengxuleo

回复 wenwen1228 的帖子
4 g) s. a  ^& N; n6 c$ z2 Q1 n! r( U6 [. p6 C
建议不要用ficoll离心后的上清，一般梯度离心时，血液都会先稀释的，所以血清的浓度不高。
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如果想要血清的话，可以直接离心血液，一般1500rpm-2000rpm离心20分钟，就可以获得血清了，同时可以参考“buffy coat”的准备。

wenwen1228

回复 ljs 的帖子& f: U1 j6 A( H" `
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谢谢你的回答，对我很有用！

realff

确实可以先离心血液，获得血浆。血浆可以通过高速离心等方法尽量去除一些蛋白质，但跟血清肯定不会一样。
% s0 N$ ?/ ~4 H4 H. y) L8 U" X, ]然后将沉底的血细胞加PBS之类的稀释，再用FICOLL分离。