请教一下脂肪干细胞可以用贴壁法分离么？如果可以里面的成纤维细胞多么？

hotcell

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脂肪干细胞可以用贴壁法分离么？如果可以里面的成纤维细胞多么？准备做一些这方面的实验，不知道这个方法能用不。

匡大鹏

我查了一篇文献说的是差速贴壁法，这样可以提高脂肪干细胞的得率。

chichao0000

没做过差速离心获取脂肪干细胞，常规方法获取的贴壁细胞很多都是成纤维细胞，但是到目前为止好像还没什么办法区分脂肪干细胞和成纤维细胞。希望大家讨论一下：如何鉴别成纤维细胞和脂肪干细胞。

匡大鹏

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9 S0 f  O3 ]! Z% T
( k5 X; B8 b' Y, u* q我查了一下，成纤维细胞核脂肪干细胞的贴壁时间不一样，成纤维细胞贴壁时间只需要1小时左右，而脂肪干细胞较慢， 所以可以使用差速贴壁法，国内大部分文献分离脂肪干细胞时候好像没有提到这一步，其实里面还是有很多的成纤维细胞的，而且仅仅从细胞形态方面很难区分的。当然，也不是说经过了差速贴壁这一步后就是脂肪干细胞了， 只是说这个SVF中，脂肪干细胞的比例会升高，实验的效果更好。不妥之处，请指正！

chichao0000

匡大鹏 发表于 2013-4-13 13:35
& R7 J% l3 |) I/ F8 \% [2 k回复 chichao0000 的帖子
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# b3 F5 r% D8 T1 ?% M! U# i我查了一下，成纤维细胞核脂肪干细胞的贴壁时间不一样，成纤维细胞贴壁时间只需要 ...

% W- a' X1 M! A7 `
是这样的，但是目前为止除了差速贴壁法外，没有什么更确切的区分成纤维细胞和脂肪干细胞的方法。成纤维细胞也可以定向分化，细胞表面marker也无法区分。

bin

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0 `7 V3 [" D( o% @! q0 O, K
- X" P7 T! i; v* J$ e" k# }5 w流式分选不可以吗？我以前做过差速贴壁分开其他细胞，发现差速的效果很有限，而且和操作人员的手法有直接关系。这个方法好像不可行呀。

chichao0000

回复 bin 的帖子8 a& S' r! [' h. `5 C7 [  \. H0 y

5 L0 C: Q/ T: Y0 G! k/ @+ {+ il流式细胞仪分选后的存活干细胞比例是个问题，我没做过，但是组内有人做过，据说存活率极低，存活下来的也非常难培养。

bin

回复 chichao0000 的帖子; G' G0 @$ y( M5 y* {

2 Z7 [( b! o: D; m% Y# [流式对细胞的损伤肯定很大的，好像用选择培养基培养会比较好，毕竟成纤维细胞的培养条件可能会比干细胞苛刻，而且成纤维细胞的生长速度也比不上干细胞，如果使用对干细胞最佳培养基培养，传代几次之后就会比较纯了，我以前做BMSC的时候是要连续传代三次才可以满足纯度上的要求的。

chichao0000

回复 bin 的帖子9 m+ q, x2 u; Z1 C
; H- X( z# y/ b% p& d( Y* O+ P% B
您有资料关于成纤维细胞增殖的数据吗？我没培养过成纤维细胞，不知其生长特性，如有相关资料希望分享，谢谢。

cartoonyang

bin 发表于 2013-5-24 09:49 , R* i+ W# v  [8 w4 i5 F9 G+ U
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9 m8 }& H" z9 G$ E0 P流式对细胞的损伤肯定很大的，好像用选择培养基培养会比较好，毕竟成纤维细胞的培 ...

- H0 G0 e0 r& V) t. ~: v
你说你做BMSC连续传3代，就满足了纯度要求，如何知道你的BMSC的纯度？谢谢！