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请大家说说你们都是用什么公司的产品来浓缩慢病毒的 [复制链接]

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楼主
发表于 2013-4-8 16:45 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
想提高逆转录病毒和慢病毒的滴度,不知道有什么好方法,麻烦告知生产厂家,最好价格低一些的
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沙发
发表于 2013-4-8 21:04 |只看该作者
一般的浓缩可以用Millipore公司的Amicon Ultra-15 离心超滤管,货号UFC910096。离心浓缩最好在低温(4度左右)下操作,这样才能最小程度降低病毒滴度的损失。
7 r( ?8 V* d4 j2 D另外可以使用超速离心法,但得实验室拥有超速离心机,一般离心力在7-10万个g,离心时间90至120min。
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藤椅
发表于 2013-4-10 11:36 |只看该作者
回复 axh 的帖子
* r4 Z$ i4 C1 ?+ G" w; |
0 |) F7 X+ X9 q% a, l$ P  ?非常感谢,那么就是把病毒原液加到15ml超滤管中离心后,病毒颗粒都在膜上了吗?然后用什么来洗脱呢
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板凳
发表于 2013-4-10 11:37 |只看该作者
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Millipore公司的Amicon Ultra-15 离心超滤管和另外一个产品Fast-Trap Lentivirus Purification and Concentration Kit相比有什么区别呢

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报纸
发表于 2013-4-10 22:41 |只看该作者
回复 ciweiyuan 的帖子7 {! W) M4 c9 T4 g7 z- M4 ~

  }3 @! }" j/ a1 m' B病毒不是在膜上,而是被截留在膜的上方,离心超滤后,剩下的病毒浓缩液体积最少有200ul,病毒就在这200ul液体里面,当然,膜上肯定会吸附一些病毒颗粒,你可以先用200ul枪头(当心不要把膜给戳坏了)将病毒浓缩液吸走后,用适量的培养基润洗一下膜表面。
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地板
发表于 2013-4-10 22:56 |只看该作者
其实自己配聚乙二醇PEG来浓缩效果跟试剂盒差不多,性价比就很高了.取上清,向上清液中缓慢加入NaCI和PEG-6000至终浓度0. 5mo1/L和8%,搅拌均匀, 4℃冰箱过夜。10000r/min离心30min,弃上清,用0.05mol/L,pH7.6Tris-HC1缓冲液3倍量稀释沉淀,若要继续提取病毒,可作蔗糖梯度离心。
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发表于 2013-4-11 09:14 |只看该作者
回复 frankieisme 的帖子3 s4 K( d9 x* w/ ^- r

2 S& a& N9 |+ l  ?( g谢谢 frankieisme 的回答,用0.05mol/L,pH7.6Tris-HC1缓冲液3倍量稀释沉淀,稀释就是溶解沉淀的意思吗?5 s0 X5 [- `) D6 S7 q2 C6 V+ `4 ^
若要继续提取病毒,可作蔗糖梯度离心。这句话不太理解,蔗糖梯度离心是用来干什么的?
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