麻烦大家帮忙看看MSC的成骨诱导

toncv

我做的成骨21天染色，大家帮忙看下吧，谢谢$ J3 `$ ]# |( ^: F0 C1 R
/ k, D  c" f1 ]

toncv

做过的帮忙看下这个算不算诱导成功呢？谢谢了

wangzhiqi86

不明白楼主为何要做这么长时间的诱导，一般10天左右就可以了，时间长了细胞全都长在一起了。
# S, k$ p$ }4 w. j6 H其实如果成骨分化成功，即使不染色，在显微镜下也能看到一些黑色的沉积，有点像像脏东西，那就是钙集结。按道理来说，茜素红染色后应该是整片的红色，不知道你的染色步骤有木有问题。

cantonchn

还可以啊~~~~

toncv

用的 GIBCO的诱导液，说明书上就要求这么长时间、、  肉眼看6孔板上就像有一层膜一样，黑色的沉积看不出来、、、 那我的红色的不是吗难道？

toncv

染色是0.1%茜素红 PH8.3 半小时 应该没问题的

细胞海洋

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否则他会看不到

toncv

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6 d' t. n6 C3 e* F, b. X我这个红染的不是钙结节染色上吗

wangzhiqi86

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* \. [- G* R9 z3 ^7 b. _) }. P. y3 D1 N; j& ^- S" M
应该是染上了，但成骨诱导确实不需要这么长时间，软骨诱导一般才在3周以上。
  M1 X$ c" {" Q: M另外，还有一个简单的办法验证。用Tirzol直接消化诱导后的细胞，收集好，做一个RT-PCR，看看I型胶原和ALP的表达。

toncv

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) I) O3 y" B1 Y4 ]! \& Y* u  J% G3 N9 [- s
我是参照着说明书来的，说明书上写着就这么久，问题是诱导成功也就部分细胞分化成成骨细胞、收集细胞来做RT ，基因表达改变会明显吗？   会不会因为只有很少部分分化成功，根本做不出差别来？