关于间充质干细胞提纯的问题

xuyang0317

        我一直是思考，我们做干细胞提取的时候，提出的间充质干细胞肯定不是纯的，有时在显微镜下都能观察出很多种不同性质的干细胞，但是我们在做传代消化时都是一股脑的都消化下来，他们说杂细胞在做传代是传着传着就会慢慢的纯起来，但是我们普遍是传到p2时就实行冻存了，而p2代不可能达到纯化的效果，冻存的细胞不够理想话。2 z; \7 u: ~2 b% o- `4 H
        我想问的是，在传代时，我们有没有必要去特意性的去消化自己能在显微镜下分辨出来的贴壁细胞，就是在培养瓶上做手脚，培养瓶的改良，细胞贴壁那块壁改良，改成可以人为的移动板块，哪块细胞好，我们能清晰的分辨出那就是外面需要的细胞，就把那块壁整下来，我们特意的去消那块地方上贴壁的细胞再进行传代培养等下面的后续工作.......
7 i1 ?* m/ o2 U/ h4 o. n/ B+ L       大家说说，有那个必要吗？为什么？

fengxiwu

回复 xuyang0317 的帖子, K* j$ h( M* m; h2 [! B, Q0 C
  T. `! Z) p, v9 L0 T; r
有一张工具叫克隆环，也就是一种环形的小物体，可以选取某个点来消化提取细胞。
0 ]! \5 C* e) W! S* Y间充质干细胞是什么细胞，具体有哪些特性，这个至今没有“绝对明确”的定义。8 C, U8 f' u+ _& w* U6 Q/ n- x
体外传代太多，不能保证扩增的细胞还是原来的那种，没有变异。

xuyang0317

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% X) l& d# m. Q7 k. t- C我现在针对的是脐带间充质干细胞，其实其他的体外贴壁培养扩增细胞都面临这种问题，您所提到的克隆环我会去查查看是什么东西，什么型号的，谢谢你的帮助

chichao0000

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克隆环：我们买的是玻璃的，详细介绍见附件。也有人用枪头自制，我们试验效果不佳才买了克隆环。
$ c  S5 }9 A' W8 ^理论上说，这种方法获取的细胞纯度高，但是我们在做人的脂肪干细胞克隆培养时发现：克隆形成少，生长慢。不知其他战友在这方面研究时是否遇到同样困难。

nydfy

完全没有必要，因为间充质干细胞本身就不是纯的细胞系，而是由不同细胞亚群组成的，除非你想研究某一亚群细胞的特性，否则没有必要这么纠结！即使需要研究某一亚群的细胞，通过克隆换什么的获得的细胞在有限的传代周期内，也很难达到你所需要的细胞量，不过，流式分选某一亚群细胞进行研究还是靠谱的！

wr7930

4 K, I( U/ d0 G8 j

nydfy 发表于 2013-5-3 08:25
  F4 H  ]- K& X& i完全没有必要，因为间充质干细胞本身就不是纯的细胞系，而是由不同细胞亚群组成的，除非你想研究某一亚群细 ...

' x0 u% a! m0 h- S

5 f% {9 F) m* S% e( f$ k楼上说的太对了，要不你培养出来的就只是一个亚群了，而且应用的时候效果还可虑

lipd09@mails

我在培养毛囊间充质干细胞的时候也存在这样的问题，我认为如果从研究的角度，对于细胞的亚群分类是必须的，而作为临床治疗的干细胞储存是没必要也是不可能的将培养代次较低的干细胞分为不同亚型。不能用传统药物治疗的方式方法来考虑干细胞治疗的问题。

xuyang0317

回复 chichao0000 的帖子  I4 a9 ^1 R% y/ \2 K/ t5 I
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好的，谢谢您了，我在自己仔细的结合自己的情况想下！

xuyang0317

回复 nydfy 的帖子2 @. z/ k3 a+ n2 ?; e
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我想了下，好像也是你说的这样，没那个必要，最近问了下，一般我们现在这样做p2代冻存的细胞浓度都达到了98%以上，谢谢你了！