关于一抗的问题

请叫我晓白

请问做免疫荧光购买一抗的时候，
3 g1 u' ~8 I! y: m$ Z8 ~, U4 q看到很多一抗都可以与多种种属反应，/ L0 R' D3 k: t8 I: m  x8 {, w
比如有个兔抗大鼠、小鼠的一抗，可以与大鼠和小鼠组织发生反应。那如果我做大鼠组织的双标染色，# H3 X/ O# M1 L
另一种一抗不是不能选小鼠来源的吗？（目前貌似兔和小鼠来源的一抗最多了）

请叫我晓白

我现在有一种大鼠来源的一抗，可以抗大鼠、小鼠组织的抗原，另一种是兔抗人、大鼠、小鼠的一抗，请问这两种一抗可以一起加吗

aminhair

如果是拿大鼠的一抗做大鼠的组织，目前有种问题就是二抗也会同大鼠组织中的部分IgG或者IgG样结构反映。因此通常需要采取一些措施，去避免。兔的一抗用起来没有问题的。往往研究中就会碰到这种情况的。可以使用探针原位杂交方法。但是技术比较难。回答完毕！

请叫我晓白

aminhair 发表于 2013-5-13 22:21 $ G4 x/ t5 O4 P4 T( z/ g3 |. |
如果是拿大鼠的一抗做大鼠的组织，目前有种问题就是二抗也会同大鼠组织中的部分IgG或者IgG样结构反映。因此 ...

: j/ u, k9 ?) @4 w谢谢你及时解答。我也觉得好奇怪。为什么很多抗体都能跟多种种属反应。很多一抗都注明是小鼠抗人、大鼠、小鼠，那就说明这个一抗是可以用于小鼠抗小鼠组织的。而且我也看到一篇发表在circulation的文献，他做小鼠组织，一抗却是用的小鼠和兔来源的两种种属的一抗，而且小鼠来源的几种一抗有多克隆、也有单克隆，我想问这种小鼠抗人、大鼠、小鼠的一抗会和兔抗小鼠的抗体一起加会发生反应吗

yangcy-smile

您好，有点太明白您问题的意思。我理解的一抗是用特定抗原去刺激Mouse,Rabbit,Goat,Rat等来使其产生抗体，这就是一抗，而这种一抗同时可以检测人，小鼠，大鼠等多种种属内抗原检测，因为用这种抗原去刺激人，小鼠，大鼠同样可以产生这种抗体，只是所用了小鼠来生产这种单克隆抗体而已。然后再用这种抗体去刺激Goat,Rabbit,Donkey从而产生G-M，G-R，D-G，R-M等二抗。所以，假如你做大鼠的双标染色，兔来源的一抗和小鼠来源的一抗是可以同时用的，只要这种一抗有写明可以用来检测大鼠种属抗原即可。只是在加二抗的时候需要注意，不能用兔抗小鼠的二抗，因为这个二抗会和兔来源的一抗想结合。我是这样理解的，自己也有点把自己绕晕了，个人观点，不对的地方，请大家指出，多讨论。

请叫我晓白

回复 yangcy-smile 的帖子
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谢谢解答。请问一抗是兔抗大鼠，羊抗大鼠，二抗是羊抗兔，驴抗羊可以吗

yangcy-smile

回复 请叫我晓白 的帖子5 V: y3 T$ m2 Y5 n2 [8 L" W/ g
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我搞的有点迷糊，一抗一般不说谁抗谁，一般说anti-actin兔抗或鼠抗。你的意思是你分别要用兔来源的一抗和羊来源的一抗进行大鼠组织双标，然后二抗就是上面提到的两种对吧？假如是这样的话，有一种需要担心的情况就是两种二抗之间相互作用的问题，因为驴抗羊的二抗可能会结合羊来源的二抗，但是不知道在实际实验中会不会发生。

yangcy-smile

回复 请叫我晓白 的帖子
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我搞的有点迷糊，一抗一般不说谁抗谁，一般说anti-actin兔抗或鼠抗。你的意思是你分别要用兔来源的一抗和羊来源的一抗进行大鼠组织双标，然后二抗就是上面提到的两种对吧？假如是这样的话，有一种需要担心的情况就是两种二抗之间相互作用的问题，因为驴抗羊的二抗可能会结合羊来源的二抗，但是不知道在实际实验中会不会发生。

hbs08230

这个描述好迷茫。。。。
3 i$ w7 y5 j" b. f2 D, Z, G) P2 }( f+ ^9 _' L" R( x
做antibody的时候，将合成的片段或是纯化的蛋白（可以是任何属种的）打入动物体内（大鼠，兔子，羊。。。。。。）等到动物体机体免疫反应出现后收其血清，用已经先被合成的片段或是纯化的蛋白处理过的proteinA/G beads将抗体纯化出来，然后各种测试过后就能卖给你了。, |8 T# c. w9 U. U0 g# ]

, {0 l5 D2 G2 P: S' C$ S9 x2 M1 A你的一抗可以识别的多少种动物是合成的片段或是纯化的蛋白所决定的，特别是合成的片段因为比较短的一段sequence，可能会有很对属种的动物都是一样的，就导致了它能识别多个属种。 - I/ V4 I. u* v% }+ }  E
二抗的决定是当时制造时，将合成的片段或是纯化的蛋白打入什么动物，就要用此种二抗。 0 w( p% B0 l8 T4 b, ^
做双抗萤光的时候，你只要确定你想检测的两个蛋白的这两个抗体用的不是同一种二抗就行了。