求教求助转染24h后却出现漂浮现象，很严重，这个是为什么？？

fwyou

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大家好，能帮忙分析一下，  E6 l0 M" a; l$ G( i" ]
293T cell 用Lipofectamine™ LTX with PLUS™ Reagent 转染后 12well的 corning 板子，但是转染24h后却出现漂浮现象，很严重，这个是为什么？？( h: n7 O1 M0 C! _# E

9 o( S" k- \) y) t& Z& E  q求教了

shihuijunm

在plate293之前，先用0.1%明胶或PDL包被平板0.5h以上，再传293T细胞，293T贴壁不牢，换液要小心

yangcy-smile

你好，请问漂浮起来的细胞是成片飘起还是大多成单细胞或者团状，没飘起的细胞状态是否正常？

细胞海洋

回复 yangcy-smile 的帖子. I) s8 \/ ?2 A' u2 w4 p

: P9 _) z2 G1 p7 }你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
* {! Q  p) e! q0 O/ M/ B) Q* W7 ^( p8 ]+ m) ]5 I" }
否则他会看不到

cheetah2020

回复 fwyou 的帖子
6 L: L6 n! s5 ~* \3 i# s: H
! x0 x' f! D( l" z# ?# E& j4 G转染试剂对细胞都有一定的毒性，先试一下剂量吧。另外前面童鞋有说239贴壁不牢，没使用过不知道，做个对照看看（不加Lipofectmine）。

zpzp0312

一定要用明胶包被3 U# Z% B; H) O/ A$ N
另外最好用大一些的板子做，因为293细胞铁壁不牢是众所周知的，你用12孔板难免在加液过程中将细胞吹松动
% }+ u) H0 V0 k& x用大板你加液时可能只是把一个部位吹松动，其他位置还是相对牢固的

yangcy-smile

回复 细胞海洋 的帖子. O2 T/ `; U5 p

5 A9 |; I$ k* O1 _' x. t9 y! n* M4 p谢谢提醒 我以为直接留言就算是回复发帖者的问题了呢  下次会注意的

yangcy-smile

回复 fwyou 的帖子! K) W& V* N$ p' P" i2 ]; V
2 X: z& L! o: b$ c& V: r7 l. X
你好，请问漂浮起来的细胞是成片飘起还是大多成单细胞或者团状，没飘起的细胞状态是否正常？

hbs08230

Lipofectamine 的毒性略大，在加入时一定要先有缓冲页面同时drop by drop 加入含有Lipofectamine的培养液，还可以考虑16hrs时换培养液。
1 C  t7 c0 H/ d  V" z2 n也能用先灭菌过的0.1%Galatin coating板子，37度2小时就好，coating过夜的也能用。