脐血间充质干细胞培养

小公

1近期进行几次脐血间充质干细胞提取，前几次先用羟乙基淀粉沉淀，后用ficoll分离液分离，明显分层，近期几次直接用ficoll分离，脐血1：1稀释，后稀释脐血2:1ficoll，发现加血时很快就下沉，和分离液混合，400g 30min，离心后白膜层混有红色，很影响吸取，# [: Y) B4 a# ]: X) O
2培养基是dmem/f12，细胞5天首次换液，贴壁多种细胞类型，长条，圆形，但后面细胞增值性差，都是圆形细胞，破骨样细胞增生，而长梭形细胞增生慢，求脐血间充质干细胞提取的经验，谢谢

weijunning

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1.首先是脐血PBMC的提取，大量文献综合之后，目前最常用的是HES-Ficoll相结合的方法。即先用HES进行红细胞沉淀，缩小脐血的体积；之后将上清吸取，加4摄氏度的PBS等体积稀释，缓慢加入Ficoll中，Ficoll与样本体积比1:2.1500rpm/min 20min 离心。' U: Z5 \' g0 q, _$ L/ ^
2. DMEM/F12培养基或MesencultTM培养基均可用于脐血MSC培养，但加入10%FBS或是自体血清之后，效果会更好。另外，接种密度也是影响因素之一，一般T25培养瓶接种密度=5X107/ml时，培养效率最高。
4 P# M; k" X* N% x5 j3.最后，不知你选取几份脐血做此试验。一般从脐血中提取MSC进行培养的频率都很低，有文献报道，35份脐血中12份才观察到MSC的生长。$ Q( d* j. J6 V
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建议你先查阅大量文献后再进行此项试验。

小公

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; u8 v! t" u( i: H
. b4 }4 y" Y8 W9 l" k1 f' ?  I# m; d你好，非常感谢您，我是DMEM+10%血清，目前做了8次了，大多数都是贴壁还好，最终20多天，增值性差，杂细胞多，是主要问题，想问下MesencultTM培养基哪家的好点，谢谢

bsx1111

脐血间充质干细胞含量少，培养很难成功，建议你做脐带的间充质吧，很容易就培养出来了

三月桂花香

我们之前也做了脐血的，后面进行了集落实验，看着还好。但是我们做脐血干细胞，没有具体涉及到间充质。

cold儿

我想请教一下自体血清怎么提取呀？我在养脐血间充质干细胞，试了很多次效果都不好，想换自体血清试试

cold儿

我想请教一下自体血清怎么提取呀？我在养脐血间充质干细胞，试了很多次效果都不好，想换自体血清试试

cold儿

回复 weijunning 的帖子+ b' K3 D0 O+ g( ^' \

! V5 C  R/ `% B* P; p想请教一下PBS(和脐血混匀的时候)要4℃吗？我之前养脐血的时候都预热到37°了，还有喔，你说的自体血清培养，那个自体血清怎么弄呀？是用密度梯度离心后的最上层血清还是？
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细胞海洋

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weijunning

回复 cold儿 的帖子2 Q% h; I1 t; a' O6 P# ~# J
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分离的时候PBS最好是4℃的；一般自体血清是第一次HES沉淀离心后的上清，先56℃灭火半小时，3500rpm高速离心15分钟后，取上清使用。