CIK加液后产生絮状物，大家来分析一下原因！！！

sunny.yc

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% n8 [* s+ {& h) b* Q8 W5 B如果实验室有HH-1的水浴锅，那1L的培养基瓶子正好可以放进去，培养箱不太好，因为培养基瓶子也不一定干净，你不能保证你的冰箱就完全无菌吧，如果带进培养箱反而不好，弄不好污染了培养箱里的细胞，而且水浴锅水导热也比空气快，所以还是水浴锅吧。, a" j/ }! B# g; v5 I; A9 j# @/ V
培养基变紫这个问题，在培养箱或水浴锅都是一样的，因为你都是瓶盖拧上的，所以，没啥区别，再说培养基也是个缓冲体系，酸碱度变化不会很大的。/ x7 k# X3 S6 u7 R* [: Y) i

' a' C3 |; }- u' W& ?还有，我觉得，有可能是IL-2，最近翻了一下Rosenberg主编的《癌症生物治疗——原理与实践》，里面有几句话对IL-2的描述是这样的——鼠剔除IL-2后，可使T细胞过度且无法控制地增值，因而提示IL-2不是T细胞在体内生长的必须因子，而是T细胞凋亡所必需。

lyj-0017

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) ]- G5 ^9 w) Z6 e5 U预热这个问题，我发现水浴应该是比放在培养箱中要好一些，至少培养基pH值没发现有什么明显变化。你说的培养基瓶也可能将细菌带入培养箱中不是没有可能，应该注意！
3 w$ x( Y2 {; I6 r% I" E  \6 z+ f$ j" K7 ]/ e; n7 i' c* n
对于CIK的扩增来讲，anti-CD3单抗和IL-2是必需的，IFN-r和IL-1可增强CIK的细胞裂解毒性。所以我认为出问题的可能是前二者，不知道你们用的终浓度是多少呢，我们的分别是100ng/ml和2000U/ml，你觉得浓度高吗？

sunny.yc

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& [, q: d9 a! j
- r: ^" j! y; g* }4 C& Q) ?你试一下100ng/ml和1000U/ml吧，2000U/ml的IL-2实在是有点高了，大多都是300U到1000U，2000U我也是第一次听说) L1 U% N3 y- r+ [0 S. o. v0 p. e7 O

8 K. L' x& Z+ l5 B, _4 S$ ], X不过，如果你现在才更改浓度，对于这份细胞来说，我觉得意义已经不大了，不过在对以后的实验肯定是有帮助的，2000U/ml，有点太高了

sunny.yc

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6 `; o  l) X+ s8 P3 J& k
还有就是，CD3单抗也只是前期才用到，所以，对于之后的扩增影响不是太大，而且单抗一般都是作为前期一次刺激就可以了& Q3 ^0 ?/ V. d, w/ Z( z/ R

3 P( F) K" k: f你不会一直在添加单抗吧，呵呵

lyj-0017

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! D( D# J/ Y* h" }* [我们用的IL-2是国产的临床注射级别的，国产的一般效价一般都比较低一些吧，你们用的是国产还是进口的IL-2呢？国产的用2000也算高的了吗？" f, k$ t; O# q  W3 x
anti-CD3单抗只是前期加，后期也是不加的。2 W( f& f% _7 B. J; f/ N
目前来看，可能就是这两种因子的浓度过高吧

sunny.yc

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) F3 C1 c) V* E
IL-2基本上都是用临床级的，试剂级的太贵了
) [* c& H- ~6 Z3 x2 W2 s  YIL-2你先试一下1000吧，基本上都是这个使用量的
+ m$ Y' w" P" R5 \. A" `$ ]* I' F3 q3 g( O9 U+ _
CD3单抗也不算高，如果你只是前期加，100ng/ml 应该问题不大，我做的培养体系也是这个浓度，基本上没有什么问题

刘艳85

请问你用的是什么培养基？这个不是细菌污染，是不是细胞密度过高得不到营养而死亡导致的问题呢？

lyj-0017

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& }# `! V( l# @
$ v& \0 J( L- M! ]0 y/ o3 p另外一个就是IFN-r，这个应该如何加呢？是在加抗CD3抗体前24小时加，还是制备当天与抗CD3抗体一同加入呢？加入的浓度应该多少呢？2000U/ml算高还是低呢？

lyj-0017

回复 刘艳85 的帖子7 d$ D$ H% x6 F( H; A8 B, F

& K9 I# {1 O8 ~用的是AIM-V ，如果是细胞密度过高的话，你认为培养袋中的细胞密度应该为多少比较合适呢？现在就是一直在找集落聚团的原因，你们以前遇到过这种情况吗？是如何解决的呢？

sunny.yc

回复 lyj-0017 的帖子0 p. M5 {. n3 Q  D' B& E0 P

  \6 [( _/ `" R2 L3 O7 b你的量是从哪看到的，都太高了吧，试试1000单位的干扰素γ，D0天一般只加干扰素