慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法
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1 W  O9 f/ b! x6 M+ u. O1 Z1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。* `+ d: d' x) i
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。
9 _% s  P' b1 v9 J) R! m+ y: e3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。3 l  J# L' o: ]8 T' w0 r
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
' Y9 z: K6 `, d9 |5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。
" q! Y! W4 E7 i! _& F1 z: w8 c& G6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。; T" q$ Q  X9 v. c
7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。
' ?8 q7 h+ v9 h& b, G0 I. k4 c: e8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。6 Q. M" Q/ N3 i6 y$ }* M
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。' P" j4 v) m0 L1 }* W: n
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
5 q) m3 o. s5 W# ^  l. P11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。( S1 m! Z5 ?4 g1 g: m$ v# `) d9 }
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
, i- @8 c" H+ j6 \4 ^13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。