慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法
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# Z6 K% y9 Q5 |1 t7 E1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。! W& f4 b/ b, e" @4 D  A
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。; I6 h6 e7 P: G% q9 S6 T
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。- z5 L( h( B# s( q
4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。6 Z6 G4 |7 u1 T9 v
5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。
. U6 f1 ]; u& f$ _6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
# c( l& F8 K2 E9 s- Q% c  I* f6 ?5 D7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。% M6 i7 K+ X; i! G
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。7 J5 m" I' j; Z% ^8 F" w9 {  J* k
9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。
4 G- V# d7 }/ H: A9 _10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
% L/ H# V% X8 l& Y8 i11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。3 ?0 j; P/ s! a  s
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
6 |. Z- |$ L" S9 W7 W7 n' @- D13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。