慢病毒超速离心沉淀法

bishengrong2011

超速离心沉淀法* o( L9 N! \3 f' g, c
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1. 取6个Ultra-clear SW28离心管，用70%乙醇消毒后，放在超净工作台中打开紫外灯继续消毒30分钟。5 I$ P, M* D: w. c; Y3 s- J/ h
2. 每个Ultra-clear SW28离心管中加入约32ml的预先处理的病毒上清液。" Z9 b: W# K9 S7 C% w
3. 取一支10ml的移液管，吸取12 ml 20%的蔗糖溶液。将移液管一直插入到离心管的底部，缓慢将蔗糖溶液打出4 ml。同样地，将剩下8 ml的蔗糖溶液分别加入到另两个离心管中。另取一支干净的移液管，对剩下3管进行同样处理。
6 I3 S% E2 \4 `- ^; m' m( K% M4. 用PBS调整各管的重量，使对应的离心管之间的重量相差不超过0.1g。
8 ~6 C# i& q! `8 }5 L3 N5. 按次序将所有6个离心管放入Beckman SW28 超速离心转头中。: k$ |6 d0 A9 R+ ?9 P1 Y
6. 4℃，25，000 rpm. (82，700g) 离心2小时。
! n  H/ R# R! P) k8 @* H+ X7. 小心将管子从转头中取出。倒掉上清，将离心管倒扣在纸巾上放置10分钟使剩余的上清流干。吸掉剩余的液滴。在管底应当有可见的沉淀。% G* i) E0 w( A$ w4 i, @6 ?$ t
8. 每管中加入100ml 不含钙和镁的PBS洗下沉淀。
/ o1 ]; c/ ]& _5 f$ w3 a$ K7 k9 b: o9. 将SW28超速离心管插入到50ml锥底离心管中，盖上盖子。% P& u, r. |0 J" R  M
10. 在4℃溶解2小时，每隔20分钟轻轻震荡。
  P/ ]9 J) `- |" D) R7 U11. 4℃，500g离心1分钟，使溶液集中于管底。( e; J) \! J0 K. t9 j- W
12. 用200μl 移液器轻柔吹打使沉淀重悬。避免产生泡沫。将所有管中的液体集中到一个SW28离心管中。
# x6 o$ \6 ]% ^7 N  I5 [13. 集中后的病毒悬液分装成50μl 每份，保存在成品管中。用碎干冰速冻后储存在-80 ℃。