胎盘造血干细胞的提取

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最近开始分离胎盘造血干细胞，但是遇到很多问题，希望大家能帮忙解决！！！！
) y4 U2 w$ d, F7 w1. 用什么酶消化及消化的时间？$ z$ d+ L) C4 |% ]( I+ }! I
2. 在冲洗胎盘的时候用大量的PBS，而且用时比较长，如何解决呢？
4 w8 t# A8 f( O3. 在整个操作过程中比较容易染菌

songhang2013

提取胎盘间充质干细胞需要酶消化，提取造血干细胞的方法（来自网络）如：：(1)收集步骤：收集脐带血及胎盘并附着条形码标签且存放于4℃冰箱，不超过24小时；(2)检测步骤：对所冷冻的脐带血及胎盘提取样本并进行如下检测，肝炎病毒及相应抗体、性病检测、爱滋病(AIDs)毒抗体检测、遗传性溶血性疾病、有核白细胞及单个核细胞计数、造血干/祖细胞定量检测(CD34)、组织配型(HLA)、造血干/祖细胞定性检测(CFU-GM)的检测；(3)提取步骤：对胎盘组织在无菌的环境和条件下，用无菌生理盐水清洗胎盘，清洗掉所有的血凝块及积血，采用消毒剂杀灭任何可能的细菌污染；再次应用磷酸缓冲液(PH7.4)，低分子右旋糖酐及细胞培养液(DMEM)按顺序清洗；将经选择后的脐带血浆、DMEM培养液和胎盘细胞共同混和过夜；剪除脐带和表层的胎盘膜，应用撕裂，研磨和DMEM冲洗的方法将胎盘细胞收集到50毫升的离心管内，在离心机内以1000rpm，5分钟，4℃离心，弃去上清液；采用16G、18G和20G的针头过滤，将胎盘细胞制成单个细胞；将制备后的胎盘细胞做以下检测：细胞和霉菌培养，有核白细胞及单个核细胞计数，造血干/祖细胞定量检测(CD34)，造血干/祖细胞定性检测(CFU-GM)，造血干/祖细胞的活性(台盼兰染色)；将检测后的胎盘组织的胎盘细胞制取的单个核细胞以1×108/ml和DMSO混合，且以10％的DMSO和低分子右旋糖酐浓度，在液氮低度降温到零下80℃，然后转移到液氮(-186℃)液相中深低温保存；(4)浓缩纯化步骤：将提取的胎盘组织细胞和羟乙基淀粉按1∶6比例混合；在离心机中以500g离心10分钟，去掉红细胞；和淋巴细胞分离液按1∶4的比例混合；在离心机中以1000g离心30分钟，去掉残存红细胞以及成熟的粒细胞；收集和洗涤各个不同发育阶段的造血干细胞群；建立干细胞库。

三月桂花香

消化时间一般是4MIN左右了，污染的话平时注意无菌操作了，然后培养的时候是不是可以加双抗呢。

jjjddf

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# h1 L/ `+ f; T8 f' @你好，可不可以把胎盘造血干细胞的提取相关文献发给我一下，

tianzhang

这些文献虽不及英文文献，但是也有些帮助