急求：WJMSC消化问题~~~

yeahjl

求助各位高手，有某有遇到脐带间充质干细胞原代细胞状态很好，可是一传带细胞就变成多角形了，就传不了两代不长了，这种情况，
% e8 X6 m; D6 F- n5 [! F- {小妹已经试了各种方法，酶（碧云天，sigma，accutase）浓度也0.25%或者0,05%，细胞还是挂了，呜呜~~~~，

元芳

摸摸妹子，说下你的培养基，消化步骤

yeahjl

培养基：L-DMEM+10%血清，消化时：弃培养基，PBS洗2遍，国产的胰酶有消化5或者4或者3分钟的都试过，sigma的胰酶一般消化2分钟，Accutase的话消化2分钟，用等量培养基终止，离心去胰酶，再种板

yeahjl

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8 [) S) ~% i8 W' z, M" S( O4 T麻烦帮忙看一下，谢谢~~~~~

漂泊的风

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* G# Y1 ~' c( S- f; P8 m- C8 U+ W; Z! O" i' H
感觉问题不大，但是消化5 min时间有点长了，对细胞伤害很大，另外你传代的密度是多大的，若是太小的话细胞时候会变得比较肥大，且成多角形，建议你等细胞长到90%的融合度时以一比二的浓度传，后边代数高了可以以一比三，甚至更多传代，祝你成功。

lic126

  消化时间略微长了点。。。可尽量摸索你手头的细胞的消化大致时间，并且镜下简单观察下，得控制好，不能消化过头。而且，消化后离心弃胰酶后，再用pbs重选清洗一遍，之后离心去上清，种板，是不是效果会好点。。？

supercell

Accutase是非常温和的消化酶，对细胞的损伤特别小，看样子并非是消化过的问题，考虑是你接种的浓度和你的培养条件。虽然L-DMEM+10%FBS或alpha MEM+10%FBS的培养条件比较公认，但不同批次血清对MSC的支持作用大相近庭。建议筛选最佳的培养血清。

supercell

另外，MSC出现多角形不算异常，尤其是在接种密度较低的情况下，细胞会因为失去细胞接触作用而呈暂时的多角形增殖，如果细胞密度和培养条件适宜，这种情况是一过性的。

孙帅帅

用胰酶消化时间过长啊！！  大约37℃消化一分钟就可以了啊！消化一分钟后你看看细胞间隙增大，然后用手拍拍就ok了。你用的是sigma的胰酶吗？

元芳

你把基础培养基换成αMEM试试。
6 F0 Y. Y* b  p9 j' S可以考虑加入EGF和FGF，浓度5ng/ml。/ X# V! [* Q- h: i' r
血清的质量很关键，你用的哪种？