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先回答下你的问题:
5 `9 F: `$ r1 c V/ Q9 t6 I- ~9 q% p1.PLZF、OCT4都是核定位,stra8编码的是视黄酸受体,胞膜胞质都有;KIT、SSEA1是膜蛋白。
' z* A& p# [5 G/ r) ~; ? x2.从我所知的。小鼠的PLZF在AsAprAal中均有表达,有文章说OCT4和PLZF一直是共表达的。也有的报道OCT4是As和部分Apr,另外,OCT4的表达应该是比较弱的,那OCT4来做IF估计不能得到很漂亮的图,我看你上面的图也是曝光爆得很长。STRA8和SSEA1是生殖系细胞的marker。KIT从A1开始表达。另外,SSEA1是根据一个单克隆抗体找到的抗原。我至今不知道是什么基因编码的,看文献,也觉得是比较久远的文献才会用SSEA1来染SSC。
e! k/ m. z8 B, [3.SSEA1全称stage-specific mouse embryonic antigen 1,对这个抗原我也比较困惑,所以一直避而不见。
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: G' O" o7 L( \# K我还想请教几个问题,你这些细胞是在培养皿底做的还是?我自己也在染SSC,但是SSC有一个特性就是贴壁特别不牢,尤其是克隆长到像你的这么大的时候,做个IF之后就都不见了只剩下些小克隆。我想问问你是怎么解决的?还有就是,你的PLZF是没有透化过?方便把抗体信息透露一下吗?我的PLZF染得都不是很强。
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) P' S' c. ]. m! v还有个建议,建议不要染KIT,因为IF这东西,阴性阳性本来就很模糊,需要对照。当然你可以去找3周大的小鼠睾丸消化成单细胞之后做阳性,但是太麻烦。而且,PLZF是转录抑制因子,它就结合在KIT上游的调控序列上。
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