精原干细胞建系后marker验证

yuanyan2010

stra8表达吗？c-kit理论上也不表达的。你这是第几代的细胞。

20111109

stra8 是表达的，C-KIT显示核上有荧光，但是荧光不是很强。可是C-kit不是应该在膜上么？第F5代

细胞海洋

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! y) Z6 w/ Y) U4 O( k点击图片可放大

490096812

做个精原干细胞移植，看看能不能产生正常的精子

w343989328

先回答下你的问题：
4 A5 m9 r  _" ?5 z5 d- b$ U# U1.PLZF、OCT4都是核定位，stra8编码的是视黄酸受体，胞膜胞质都有；KIT、SSEA1是膜蛋白。6 H, M# Y# W1 k1 l  H4 X
2.从我所知的。小鼠的PLZF在AsAprAal中均有表达，有文章说OCT4和PLZF一直是共表达的。也有的报道OCT4是As和部分Apr，另外，OCT4的表达应该是比较弱的，那OCT4来做IF估计不能得到很漂亮的图，我看你上面的图也是曝光爆得很长。STRA8和SSEA1是生殖系细胞的marker。KIT从A1开始表达。另外，SSEA1是根据一个单克隆抗体找到的抗原。我至今不知道是什么基因编码的，看文献，也觉得是比较久远的文献才会用SSEA1来染SSC。& l( D& E) ?+ @# Y* O0 j% Q
3.SSEA1全称stage-specific mouse embryonic antigen 1，对这个抗原我也比较困惑，所以一直避而不见。
' h& J: m# i9 J; B+ I6 h- g; @5 w; t& B7 e9 w' `- i; V( B
我还想请教几个问题，你这些细胞是在培养皿底做的还是？我自己也在染SSC，但是SSC有一个特性就是贴壁特别不牢，尤其是克隆长到像你的这么大的时候，做个IF之后就都不见了只剩下些小克隆。我想问问你是怎么解决的？还有就是，你的PLZF是没有透化过？方便把抗体信息透露一下吗？我的PLZF染得都不是很强。; d3 a2 P4 b" V  z1 V5 r* w& d

1 ~/ Q( K  @) C' ~$ B0 E: P# i还有个建议，建议不要染KIT，因为IF这东西，阴性阳性本来就很模糊，需要对照。当然你可以去找3周大的小鼠睾丸消化成单细胞之后做阳性，但是太麻烦。而且，PLZF是转录抑制因子，它就结合在KIT上游的调控序列上。# n# |2 [+ T( `, f; t/ `- _

20111109

回复 w343989328 的帖子) R  T# s$ [; v* @. k8 W
8 a' b  I+ y( Q: A
1、贴壁不牢的问题：我底下还是种上MEF的。; d- ~4 \, x, D$ C$ u: h
2、PLAF下没有透化，RD AF2944

w343989328

回复 20111109 的帖子$ Z2 w  ]; K2 l
7 k0 d: J; f  p, u& y
我也是用mef养，你是brinster的体系吗？

20111109

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# r" j  l& T+ D9 G, }, p  g  X, m. Y
no 是shinohara 的

w343989328

回复 20111109 的帖子' t+ H; G7 _% O6 g7 A: R4 _7 ]: f
: t0 B9 a1 L! r* y  A8 p
好的，谢谢了，我也觉得shinohara会比brinster的高级一些，青出于蓝胜于蓝嘛

gemstone

SSC在培养到2个月以后大约12代以后，oct4的表达会明显下调。不知道大家有没有这种体会啊？