精原干细胞建系后marker验证

20111109

8 g, j# a) t+ t9 N+ B

+ [7 P8 L+ o' M0 e; ~2 K  ~/ M5 y+ ^
$ S" b, Y! x% Q如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等2 S9 w/ E/ V7 a+ r/ R
我想问的是
+ g% F1 c% P% B1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）
$ ]( B! d1 Q8 a+ f2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）
& L+ `% j6 q) j% G( i) Q3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。
2 {, O. \3 P/ O5 k9 q2 e& |4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。! `/ }0 ]  g% E
刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~' e! z" T) m5 I

+ ]9 _. y% }3 O) P! e* `2 F- q& D% @! _

jialiyang

回复 20111109 的帖子1 N+ k" P8 y  j3 s  }* g1 }$ |9 p

9 v* o, Z! j, Q: ?. H1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
2 V: I: m1 o7 X/ @. M+ g4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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+ I& v( w) c  z; i  \0 ^, K
+ z# o3 w1 B8 J& L9 Y9 G你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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' q) b( p2 @" c
% T9 M" m/ n! c, J! [抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

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, m1 V9 V* _% W; h6 _8 @# P0 O. s* J; \- |- h9 z6 {
嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

( v2 k! Z( d# T& g

20111109

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" B- E% n) ?) p: N. _) |' x& d5 |0 b
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。
) X  o/ S$ g+ y7 c% r+ {4 ?其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。4 k* _' b1 H2 v8 ?2 I( {  p3 ^3 q
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

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: P2 r9 j& D4 ^1 J% O/ y
2 r  B+ H: c! E; J1 @! k6 K感谢您的答复~~4 |# m8 L( T2 J1 P) k9 a3 M+ ?  q
我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。1 i& x8 {- h$ {& k
您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
! ]- e1 v* d; v9 X1 W: ^6 n但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。