精原干细胞建系后marker验证

20111109

9 }  V0 t. ?+ C# d/ Y0 X
5 d3 z* _4 e: A& w0 j

# O/ b; _5 l; {5 u! X& f3 `如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等
, S% s. F0 |1 I" I我想问的是
  a  ^1 N1 k" n+ H" h$ \1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）& i7 f  m( ^' ~1 A6 P/ G( G' T
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）) M1 c# b8 c; u$ ]4 ]5 a
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。% u0 h; w; H8 g3 I( M2 B9 s' q, [
4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。
; B' d. Y: u' x( \刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~/ K; |0 K2 d) w: C

# K" T$ Z, s  U8 l# [# c6 `5 z7 I' Z$ |. U

jialiyang

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. p3 i0 A/ r; `6 u9 g: {: [8 C. F  F' v- `) x6 y* u
1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白
9 }1 a- i+ r, s$ u4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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% J) y0 C( [& K+ g: H7 d0 E- s% E$ Y; z9 [! |0 n6 }: a
你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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& Q, g! K. d9 Q4 Y. C2 }! i$ ?  S
" D, S4 T3 {3 H0 L抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

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" K3 T0 e* S$ X) ~- u& C5 o7 T! K1 t% y5 W
嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

  ]  S( x- R- d- ]! Y" r

20111109

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& R: m, J7 V- x2 j. a6 P4 Y/ G1 U4 D, R: {" ?; F1 r. v
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。# @/ |1 @5 `- E$ g$ t
其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。3 M) R7 n5 j( n' C' }
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子' ]$ S/ x( l2 q- r# y

' f! d6 K  y( Z3 m1 `' l感谢您的答复~~6 v0 L; M/ Y( c( J: ~2 d
我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。& z8 c9 u5 u7 Y% T; r: R% r& I
您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
. k/ _, t. P9 W0 @# G7 i但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。