H1诱导分化，加RA第3天ES大量死亡

卷了个卷

求助：
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' R  f' A3 o  u. L最近在做人ES H1 诱导上皮分化，按照文献加入RA（1uM）联合BMP4（10ng/ml）。刚开始ES细胞呈明显分化形态，但是在加入RA的第3天，细胞突然大量死亡，存活细胞很少。除去诱导剂也没用。请问有人遇到过这种情况吗？怎么回事呢？愁人，好几次都是这样。。。
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1 M% w/ i7 c3 E( O; @; k  ~! M( v谢谢版主提醒

bio-bin

不知楼主参考的是哪一篇文献，目前也在做诱导，但没遇到这样的情况！

qiushuiwuhen

是用feeder-free 的HES还是EB球诱导的，是多久换次液体，另外RA是要严格避光的，还有考虑是不是操作的问题，共同学习下

sun_happone

我之前也用你这个浓度，不过不是用ES做诱导的种子细胞，也导致细胞大量死亡，所以后来把RA浓度降下来使用，细胞死亡率明显降低，效果也不错，你可以试试看。

卷了个卷

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无feeder的 hES。每天换液。RA避光配制和分装的，加到培养基的时候关掉了操作台的灯了。同期我做了无诱导剂孔，也是前两天正常，第3天死亡。现在我把浓度降下来试试

卷了个卷

回复 bio-bin 的帖子
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好几篇文献都是这个浓度呢，倒是BMP4不见得都用

卷了个卷

回复 sun_happone 的帖子# F8 `2 _$ B9 }3 z! y- j

( ]% c3 q$ t9 ~( C' y+ b) g你降到多少呢？请问你是诱导什么方向，效率如何？  # r+ f  H' W9 y6 ?; l/ E. q5 T
我现在降低浓度正看着呢，明天就是第3天啦！

qiushuiwuhen

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+ r7 [9 t3 X! F4 p6 d/ T2 w' f- ~9 y+ @# Y: S7 c, h
有没有照片呀，记录下来，可以的话上传一张看看

memory

很可能是细胞本身状态不佳，跟诱导无关

卷了个卷

加RA第一天' H% B7 [* S- r' q3 p
第3天6 b0 n5 `5 A/ u# h: h* m
第7天