关于组织块法培养干细胞的问题

shuimochunlan

在间充质干细胞培养过程中，往往采用组织块法培养，降低细胞损伤，且简化实验步骤，但是我想请问，在无菌操作，二氧化碳培养箱条件下进行的组织块培养，时间久，或者组织块没到干净的时候，会出现什么情况，会不会产生异味？

倔强的投手

不会的，我用过猪和牛的脂肪组织块培养，获得间充质干细胞。. \" s% e# p4 O4 ~/ ~
采来的组织可以用碘酒洗一下消毒，然后用无菌的PBS洗干净，去掉外层的组织后，将组织剪碎，然后将剪碎的组织小块摆在培养皿上，用灭菌的盖玻片压住组织，防止组织飘起来，加上培养基，放培养箱就可以了，4天换一次培养基，大概5天左右就可以看到从组织周围长出来的细胞，大概9到10天昨天把细胞消化下来铺板就可以了
+ x2 C1 `: p8 d* I2 @http://animalsci.highwire.org/content/88/6/1999.full.pdf+html你可以参考这篇文献

wind789

倔强的投手 发表于 2013-7-30 23:20
. r" |2 P2 \% o" w4 e+ E不会的，我用过猪和牛的脂肪组织块培养，获得间充质干细胞。& S8 p1 T, `/ ^; l. w3 n
采来的组织可以用碘酒洗一下消毒，然后用无菌 ...

. k7 h6 f% i1 E; |" U, w& {请问你的细胞鉴定结果如何？我感觉脂肪组织如此组织块培养，容易混杂很多成纤维细胞。不过一些表型上，成纤维和间充质区别也不大。

deshenglll

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0 T7 b" o( F7 R) F; r
, n3 I4 }5 f( c5 u不会的

shuimochunlan

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3 \0 @+ ?9 _7 }1 o$ u% q/ b5 q0 T: r4 `
哦，你们换液时组织块一直不去除吗？细胞会自动爬出的，然后贴壁，当细胞贴壁后组织块还有存在下去的必要吗？

shuimochunlan

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, ^* {! w; h7 l, a5 b; s
# n5 o* F6 P6 a4 _/ w8 e肯定会混杂的，但是经过两三代的纯化应该没问题，三代后间充值细胞的比例就会很大了吧？

huangcong1988

组织块贴壁法培养细胞我做过，比较慢，而且组织块分离的细胞容易污染，组织块游离出细胞以后，细胞长满以后，组织块不要丢掉，还可以接着培养的，组织块能够重新贴壁

倔强的投手

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  F. h) d: E7 W$ n因为我做的时候，组织块是压在拨片下面的，所以没有去除组织块! {* N& i. _) ]; A
只在把细胞消化下来的时候，才把组织块弄掉

沙漠狐o0

回复 huangcong1988 的帖子$ p4 l( ?- a/ C6 ~3 T) z& @: G
, V* r: _3 m4 j
这个样子也可以么。。。一般细胞爬满后，组织块就扔掉了的。。。这个以后试一下

huangcong1988

回复 沙漠狐o0 的帖子/ p! l5 M$ b% P) t# w
5 r% D$ C, {, \1 _. j/ g
这个真可以，已经做过尝试了。贴壁5~6次是没有任何问题的，最后组织块越来越小，而且贴壁性越来越差，但是分出来的细胞是一样的，增值能力没有影响