CIK培养加液时机问题！！！

lyj-0017

我们都知道，CIK自培养开始至第三天或者第四天时，细胞数量一般有所降低，% O6 F1 W# r1 a4 g3 T3 `4 W
   如果是在培养瓶中培养，此时可以根据取样计数结果选择换液，操作比较方便；
# E5 F2 b1 G0 S; m   但是如果开始就在培养袋中培养，培养至第三四天的时候应该如何加液呢？如果直接加液的话，此时的细胞密度应该会比初始浓度更低了吧？如果根据取样计数结果换液的话，是否会增加污染几率呢？

cjsbaicai

说是第三天，实际一般是隔天补液。培养袋一般都配有取样口，和补液孔是分开的，口头有橡胶塞封住。取样和补液时注意酒精棉擦拭或者酒精灯附近操作就行

lyj-0017

回复 cjsbaicai 的帖子1 U2 @/ d3 a  z1 V/ [' W

& p( r% U' \& Y( h) {' ]比如加入袋子的细胞密度为1.0x10^6/ml，到第三或者四天时，细胞密度应该有所降低吧？这时如果加液的话，细胞密度不就更低了吗？细胞后期还能长得那么好吗？
+ J! m) @, F3 w* w另外，你说的隔天补液，比如今天上午9点补的，那下次应该到明天上午9点补，是这样吗？" ?/ S) d( c3 b9 K
多谢啦~

xu_shufen

在细胞培养袋中培养CIK细胞如何补液：淋巴细胞在细胞因子作用下，进行增殖、分裂，同时消耗培养基中的养份，代谢出许多废物（比如CO2）。另外也分泌出许多细胞因子，这些细胞因子也有对细胞增殖、分化有益的，所以补液时要根据细胞的密度，要观察培养液的PH，当细胞密度超过一定数量后，培养液变酸，不利细胞生长。所说几天补液，只是许多做过CIK细胞的经验说法，真正培养细胞要测定细胞密度，经验多了以后也可肉眼观察。另外培养液中大多有酚红，也可通过观察培养液的颜色进行补液。还有并不是营养越多越妈，当细胞密度太低时细胞反面生长状态不良，这里也细胞和细胞之间、自分泌、旁分泌作用。

jiefengbing

回复 lyj-0017 的帖子  O9 v  {" K+ P

8 @# Y7 A7 n1 U( g. v8 r你说的细胞数量降低是指去除了诱导DC的那部分吗？

lyj-0017

回复 xu_shufen 的帖子. @. n1 T* b' Y- I& v. a& c! U

$ k' m" u0 z3 b: G3 ^8 S6 m3 f你说的很有道理，细胞培养是一个动态过程，如果不经过严格的指标监控，初期也只能通过经验进行补液。你说的“细胞密度太低时，细胞反而生长不良”，这种现象也确实遇到过，细胞初期长得不错，加液之后感觉细胞很稀，后期就不怎么长了，这也是个教训吧。" c5 O$ J* G1 _/ A5 U* r
那你们是如何加液的呢？加液之前先取样计数再加吗？细胞密度应该多少为宜呢？
+ u5 [$ c6 u: W8 P多谢了！

lyj-0017

回复 jiefengbing 的帖子
7 L( W& P5 e8 S; S( k, a6 \" F- P0 _  t2 I1 L/ P
不是去除诱导DC那部分，是诱导CIK的那部分MNC培养过程中会死掉一部分，包括单核细胞、巨噬细胞之类

weijunning

一般在头三天不会有很大的减少，大部分都处于相对静止期，细胞数没有增加也没有降低；一般从第四天以后就开始呈现逐渐上升的增长趋势。我们都是做过很多样本的生长曲线的。

jiefengbing

回复 weijunning 的帖子% w" }+ c: q8 i' C: e0 X7 T! T7 Q4 T
1 k4 s# s( d! s3 Q# s
那按照您的说法，头3天不需要补液了，等大量生长的时候补液即可。

weijunning

回复 jiefengbing 的帖子! o1 J; g: q$ ?0 Q; V) E/ ?) k0 ]# M
6 w% @: o2 A7 a* E
是这样的。一般头三天不用管，三天之后再视情况进行操作。