hES传代的问题（维持培养）

郁金凤

hES传代时大家都把ES克隆分成多大的细胞团进行传代啊？分成多大的细胞团进行传代时可以减少ES的分化，ES还长得比较好？

linlicau

郁金凤 发表于 2013-8-24 10:44
- J% D! O: c6 i, ~. J3 ^8 C5 ~hES传代时大家都把ES克隆分成多大的细胞团进行传代啊？分成多大的细胞团进行传代时可以减少ES的分化，ES还长 ...

+ R! B" p. w' T8 M一般情况下我用刮的方法传代~ 用挑的方法也可以，一般把一个hESC克隆分割成4份。
, G  y4 Y( l1 P1 ]$ @, t# H( m
$ X8 p8 ~4 U$ C% `其实分化与否与ESC的大小关系不大，只要MEF好，无论怎么样都不会分化。

amywang

用 dispase 消化，刮传，几乎不会分化啊

郁金凤

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+ U: N: Y0 N- T7 a; q- \( v
( v3 f* G$ T6 P  X0 O, h恩  thank you！ 我们实验室都用挑的方法， 就是有时候ES克隆分割的太小了 不容易贴上容易死  克隆分割的太大了 ES又容易老 刚开始做实验没经验 这个度很难把握  
0 w' Q( I; N0 ?( p

郁金凤

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$ H" W3 |" @, e
$ V; d- M9 B3 L5 M您能不能具体给我说说呀？thank you！

星光灿烂

用 dispase 消化，轻轻吹下来，不高于800转离心后，吹打几次，团块不要吹的太小，如果总吹成接近单细胞的状态，养时间长了就不行了。我传一般不用刮的。

郁金凤

回复 星光灿烂 的帖子) n6 _+ W+ W/ E, [5 j0 a

) f1 X; U5 j' E: g恩 好  那我再试试  你吹成的团块大约都多少个细胞大小啊？

星光灿烂

这个具体没数过，团块大的话获得的克隆就少，长的还快容易老，我一般吹的比较小，但是肉眼要看到团块的样子

郁金凤

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! d. j+ A) H, b, O9 V/ P/ L
, r: a) ^7 j2 O8 M7 S4 G恩  好 那我在摸索摸索  谢谢你啊！

Jonathan

买点accutase，直接消化成单细胞，然后1开6或者1开8的比例进行种植。非常方便