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楼主: changbaihou
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[讨论] 悬浮细胞球的免疫染色方法   [复制链接]

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11楼
发表于 2013-9-4 18:52 |只看该作者
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我也养这种球,很是郁闷,免疫荧光效果不是很好,散光一片。免疫组化的话,那么小个球能切么?
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12楼
发表于 2013-9-4 18:53 |只看该作者
我养的球才100微米,肉眼刚可以看到,楼主养的球多大啊?
$ X  w% P  G* w

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13楼
发表于 2013-9-4 23:24 |只看该作者
回复 yuanshenyewu 的帖子. _' x% I0 U2 B5 X5 d

' Y$ r$ m  g: G+ t, V9 V' b$ w我养的第三天开始成球,很快超过200um,然后就开始互相融合、中间开始坏死。
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14楼
发表于 2013-9-5 21:17 |只看该作者
中间坏死是怎么看出来的呢?被包在里边,我原来一直以为是保护里边的重要细胞呢
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15楼
发表于 2013-9-5 21:48 |只看该作者
回复 yuanshenyewu 的帖子* F& u# O9 m7 t( E

" g$ s& _  a- W! [- C6 w中间的细胞由于团块过大,失去营养而坏死发黑,失去正常的结构和折光性。
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16楼
发表于 2013-9-11 13:32 |只看该作者
回复 changbaihou 的帖子" ^4 B! |. ~/ e1 L7 t5 |" [
: W: u. w' X) H+ L0 N) k# J6 d
我不知道你说的细胞贴壁是指什么,细胞球可以贴在玻璃片上,如果时间太久球中的细胞就会趴下来,但是时间不够的话在染色的过程中细胞球很容易掉,所以贴壁时间是非常关键的,我以前做的时候是不加血清,贴1-2个小时细胞球就可以贴好,但是有些细胞已经开始爬下来了,你可以在一个玻璃片上贴很多球,最后拍照片的时候拍好看的就可以了。
- m5 s& y7 L' R, _4 Q
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17楼
发表于 2013-9-11 14:14 |只看该作者
回复 bin 的帖子
3 C( S0 A7 y" b/ R: Y3 c# _& k6 k& ^0 a
多谢,我是想让细胞球消失,细胞在片子上贴成一层。
3 j" B" m: l' _1 o' d, S1 z! D7 K9 z/ @3 e
看来不需要充分吹打细胞球,把他们分散成单个细胞,他们会离开细胞球,自己往片子上爬。
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18楼
发表于 2013-9-12 11:52 |只看该作者
回复 changbaihou 的帖子
& m, J$ Z5 x5 _
% e; Q6 G2 @6 V" p$ S( ?6 n( D, x8 L8 N我试过,通过包被玻片然后是细胞球贴壁,关键是看什么细胞,我的是神经干细胞球,大概2h左右,如果太久细胞球就散开了,如果太段贴壁不牢固,在处理中很容易掉
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19楼
发表于 2013-9-12 16:04 |只看该作者
做免疫荧光也是不错的选择吧
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20楼
发表于 2014-5-2 19:55 |只看该作者
回复 bin 的帖子
/ u5 O0 t- v9 g3 J3 z. t* o' u; j: c( j4 T
用PLL或Laminin的玻璃片是什么样玻璃片
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