western blot出现这种结果是什么原因？谢谢

zxmflying

有可能是蛋白降解了，或者是抗体的特异性不好，配胶的时候也要注意，跑电泳的时候电压不要太高

daviddow

谢谢大家的建议，我按照大家的说法看看是不是以后会更好。谢谢。

moonison

在上样之前高速离心的时间稍微长一些，很有可能是裂解不完全，上了一些沉淀造成的。最好煮完之后再离心，其实就是一些膜组分造成的。

daviddow

谢谢各位提出的宝贵意见

lazyworm

可能是胶没凝好，蛋白上样量太多。

daviddow

回复 lazyworm 的帖子1 S: b& }  G! S+ x8 m, o
  Q1 c/ W6 @6 A, u% Y& v; }
谢谢lazyworm了，我不知道是不是裂解的时候蛋白时间太长了？具体的也不知道什么原因。后来这个现象也没了。原来见过这个现象

wateryong

我怎么感觉是样品没有浓缩好啊。第一张图。

wateryong

回复 懵懂干细胞 的帖子6 y0 v- ]' j* i
' {; A$ n9 J* l  k* _0 H! a
请问，你这个图用的发光marker是哪个公司的啊？感觉比我们实验室的效果好太多了。我们做出来的marker都看不太清楚，而且不整齐，特别是100kd以上的条带。会不会和胶的浓度有关？你这个胶的浓度多少？30%聚丙烯酰胺的比例是1:29还是1:37.5的？7 I# c& d+ W4 j7 K/ ~: }
还有就是你发光marker上样量是多少？biotin的抗体浓度多少？

lazyworm

回复 daviddow 的帖子
7 k1 i2 b; C2 z: z3 |. t+ C& _: v2 e% b# v' e! d& @
我觉得不是裂解的问题吧，每次裂解我就加上RIPA，有空就摇一下，30min就吸出来离心，感觉这一步就没那么细致。倒是后边的制胶转膜需要很细致。

daviddow

回复 wateryong 的帖子4 n: s  _) |2 D) }* m! U

5 {: k$ G/ l# J% o我这没有用发光的marker。我加样的量是20ug