western blot出现这种结果是什么原因？谢谢

daviddow

最近的试验western blot出现了这样的结果。大家帮我看看是什么原因？谢谢! L3 Z& G9 y; w- U
1：是不是裂解的时候过长？. W+ ?7 Z- U/ W* c
2：是不是SDS-PAGE电泳的时候电泳液出现了问题？

daiying5200000

曝光没弄好吧

app_1983

不知道你的实验条件是怎样的，一抗是单克隆抗体还是多克隆抗体，单从这张片子看起来的话，感觉跟电泳液的关系不大，像是封闭过程没做好，出现了非特异条带及背景；另外你想要的是哪条条带呢，如果是想要上面的条带，而不是最下面较黑的条带的话，那就有可能裂解的时间过长，导致蛋白降解较多。

innatestem

1.能不能说一下你的裂解条件？/ ^# b0 s& F# l5 V  w+ ]4 Q
2.可能与你的转膜条件有关，你用的是干转还是湿转？
9 P' V  u2 W( X% D0 j3.有可能是你的一抗浓度不太合适。$ p, G+ F2 L3 e7 |
4.用PBST/TBST多洗一两次。' a' l$ a/ b. V' z7 c2 o$ o: ]) M
5.曝光的时候控制一下曝光的时间

jackywangzr

由于不知道你的试验条件，不好判断。
6 R% L9 m3 w: |/ Y# G/ M# \但是出现这样的条带是不是你用的是多抗啊？？特异性太差。
$ h& @9 R2 D9 D3 B& k, t- w如果以前做过的话建议洗的时候加长时间，加大次数，效果会很好的。

susuloveq

应该是胶没配好

meister

回复 daviddow 的帖子6 D( z# x2 f; o( S

. }0 a% p/ D2 L+ S应该不是抗体的问题，也不是胶的问题。
2 v' W/ Y( M) U) b
( _! G- o7 S. ^+ q6 Q我估计最大可能是蛋白样本制备的问题。有可能蛋白浓度过高，或者DNA裂解不完全。

懵懂干细胞

2013-9-29 19:02 上传

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你看我的也出现这种情况，开始我没太在意，以为下次蛋白制备，制胶和电泳等严格点就会OK，结果又出现了，
  ~# y1 G: s  V, p- j我现在怀疑的原因有两个，第一：是蛋白浓度过高，第二：是裂解时间或者强度有点过了！) q4 h$ j  Q2 }( C) Y
我准备重新提取下蛋白试一试！ 如果哪个高手遇到此种情况，还望赐教解决方案，省走弯路！

懵懂干细胞

http://emuch.net/html/201010/2445729.html 这是小木虫的一个战友求助的帖子 出现的问题可能差不多，可以参考下人家是怎么解决的% c  O) z, F/ ^
如下：
) m4 j6 s5 ^9 ?1 W4 E同志们，偶的问题解决了。
1 E  o8 f& x. \+ Y7 G 1、偶重新配制了loading buffer；, L* v; \) M0 N5 j+ s7 ~9 c( m
2、裂解完细胞后取了部分上清做蛋白定量，然后立马加了等量loading buffer
$ ^) K0 L) b; a) p 。以前偶都等定量结束才加的loading buffer；1 ?8 {7 k! T" H, r$ q* L
3、偶每次上样前，也有离心哦：7 j( V( j% O- G. I
4、一切程序一定要在冰上进行。

懵懂干细胞

顺便问一下：会不会是没浓缩好啊？