大家给点意见，我用的0.25%胰酶不含EDTA，消了3min，MSC纹丝不动，拍打、吹打也不动

wen373

1.建议用离心管分装胰酶。使用方便，避免污染，避免多次预热-以致其失效，量少，一管很快就会被用掉。
& L+ X! V5 C7 `3 s0 I5 ~, l; k2.加EDTA会好些( f3 h% @( ^8 Z7 D. y. W1 b
3.还有一种消化方法：PBS洗完后，加适量胰酶，吸掉多余胰酶，放37度里，10分钟。其实胰酶不用预热也可以，从冰箱拿出来放在室温下一段时间即可。" l0 n3 ^; u9 j, v
4.你确定你拿的是胰酶？

bishengrong2013

回复 wen373 的帖子
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bin

胰酶中的EDTA的钙镁离子的螯合剂，而这些二价离子会使胰酶失活的，所以胰酶中通常都添加EDTA来去除钙镁离子，即便使用含有EDTA的胰酶消化，消化前也必须用PBS或者是不含钙镁离子的缓冲液清洗培养基中残留的血清，血清也可以使胰酶失活。至于是否需要预温，这个是个人习惯，反正我每次消化都不预温的。最后给一个建议，不要使用0.25%的胰酶，买0.05%的商品化胰酶消化细胞会比较好，这个浓度的胰酶更加温和，对细胞伤害更小，即使是消化时间适当延长也不会造成太大伤害，希望能对你有所帮助，祝你实验顺利。

bin

还有就是液体胰酶不要反复预温，也不要反复冻融，这样很容易失活的，要么直接放在4度，要么分装使用。

feifangli

用含EDTA的胰酶试试吧。

bishengrong2013

回复 bin 的帖子6 m2 ?  f3 r; V# M

5 J  y4 ?7 [0 ^% d: Q( a谢谢

孙帅帅

回复 bishengrong2013 的帖子3 K2 \: j6 ~! T) U0 `. ]" D( f# r
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注意  稀释就ok了

aochongyu

加了胰酶以后要是消化效果不好，可以用移液器反复吹打，应该就ok了

东门吹水

我做的是骨髓间充质干细胞，也是先用PBS洗了两次再用胰酶消化，大概消化了5分钟，有些细胞就是不掉，吹也没用。怕是别的什么杂细胞，也就不要了那点细胞了。听师姐说，间充质干细胞本来就贴壁较牢，要消化久一点的，可能要六七分钟吧。

绝对忠橙

回复 东门吹水 的帖子4 G! S0 w% i, A- b
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我觉得如果时间很长的话可能就不是bmsc了，上次也这样，消化了5分钟下来了1/4，很郁闷，我分析了几点原因：1.换液时用的生理盐水冲洗，没有用PBS。2.胰酶从冰箱拿出来就加进去了，不是最适温度。3.细胞密度太高了，长过了。4.最不想出现的情况就是下不来的细胞不是bmsc，因为bmsc消化应该很简单的，有的文献强调换液的时候半量换液并且尽量避免生理盐水冲洗。小小的看法，呵呵