大家给点意见，我用的0.25%胰酶不含EDTA，消了3min，MSC纹丝不动，拍打、吹打也不动

jojo1988509

我也觉得你的胰酶有问题，正常来说哪有细胞贴壁勒么强悍啊……

懵懂干细胞

回复 weijunning 的帖子
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胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强.

weijunning

回复 懵懂干细胞 的帖子" U4 i: {" Z5 [

( x, T7 h% Q5 O7 t3 E0 M8 m$ ^& j你之前写的是ph8.5哦，可不是8.0.这么强的碱性，对细胞伤害很大吧？虽然此时胰酶可能作用能力最强，但对细胞伤害很大，我是这么认为的。我觉得不用将PH调整到碱性，只要37℃即可。

漂泊的风

你的MSC是什么来源的，小鼠的是很难消化，我加了EDTA还是很难消化下来，人的还是比较好消化的。

jane1lee

应该有两种可能吧：1，你的胰酶可能失效了2 ，你的MSC可能分化了，不在是MSC了。我之前也有过这样的经历，培养的时候血清加多了，MSC细胞形态发生了变化，传代的时候，细胞就很难消化下来。

sewing

回复 bishengrong2013 的帖子
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我们以前培养间充质干细胞的时候也出现过，常发生在四代以后的细胞，可能细胞老化了很难消化下来，就算延长消化时间、增加消化酶浓度、加强拍打力度最终得以消化下来，经过这么多折腾，细胞状态和特性也可能会产生一些变化，我们一般选择放弃这部分细胞，尽管有时候在一个培养瓶里面这些细胞占的比例达1/4。

月_幻影

我也怀疑是你胰酶出问题了，该不会是你预热的时候导致它失活了吧，一般我们都是用前拿出来至室温时使用，加了胰酶后放入37℃中消化，效果也很好的！

wf78365421

怀疑是你胰酶出问题了