这是克隆吗

franklinhg

回复 pjlsyz 的帖子) t9 f. B; c% ~( w( q& `: U& H
9 H7 y, ]6 E4 O3 z$ b/ X
质粒要回来后，你自己做了哪些验证工作？你敢保证给你的质粒完全没有问题，你就开始在做了？做出来的结果，现在自己也不敢肯定判断。。。不知是你老板太push了，还是你太急功近利了。。。这样做，后期你怎么去深入？先静心下来看看文献，找找资料，做了质粒验证再开始实验吧。。。

pjlsyz

回复 franklinhg 的帖子) r+ o4 Q! T4 }0 v) L

/ G+ D9 x  j4 s已经酶切测序验证过了，只大概看了感染效率，没具体测定滴度，现在就是在做后面的诱导了。

bubble_w

回复 pjlsyz 的帖子  X5 ^. L' K7 i# g0 ?: v4 {- W

( u$ t3 X% F  s1 l5 t3 j; H5 _: e感染效率是用什么方法评估的？有多少效率？

pjlsyz

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( d# d, G' j9 D. j+ }4 D1 ]& r! N3 Q  V! U: r
只是感染293t后，看了下发光细胞占全部细胞的百分比。

bubble_w

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% R* }0 L* L6 l6 j# G$ |' b  S/ V4 z4 P4 j
我们是做了一个相同质粒骨架的GFP对照质粒，然后利用293T细胞包装病毒后感染成纤维细胞，从24h开始观察细胞，计算GFP表达的比例，选出效率是100%的病毒包装组合，然后再去做iPS。因为病毒包装需要摸索滴度，比如包装质粒的添加比例也很重要，建议你再多查阅文献，把实验设计的细致一些。

小兔子lp

这是什么细胞诱导的 ips 呀？好像没铺在 feeder 上呀？另外看第二张大图，边缘好像不够整齐平滑~

pjlsyz

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# p# l& i8 x; v. [1 s- d3 Z6 Z# V3 c6 n1 L9 d& g7 S3 _0 C
山羊耳尖成纤维细胞，铺在feeder上了。

pjlsyz

回复 小兔子lp 的帖子0 ~! l) a9 h5 m+ N7 j' Q9 w

4 r: c. V7 o  r  x山羊耳尖成纤维细胞，铺在feeder上了。