这是克隆吗

pjlsyz

0 k/ g5 h$ D  g' y( T5 w7 l7 w: f$ Z. N! ^! D
这是诱导12d时的图片，是细胞太多了结成的团块还是重编程完后又有点分化的细胞？主要是整板都是这种状态的细胞。

franklinhg

很多背景信息都没有告知，不好说。。。。如果是GFP的，那里看看荧光不就行了嘛？ 如果不是 GFP的  那挑去出来passage，或者是做QRT-PCR或者是用life的一个活体蓝色的ALP试剂盒染色后看看吧。。。

pjlsyz

回复 franklinhg 的帖子' i6 e# r8 W, r6 ?6 a3 \0 @" g) I' N
8 Z9 z. H  u1 i0 G1 a9 L* Q8 @! {
有荧光，因为我用的是tet系统的因子。主要是想问问这样的形态对不对。

漫步云端0511

细胞长老了  还是做QRT-PCR检测一下，看看基因表达情况

bubble_w

这个不是克隆，我之前做人的iPS诱导的过程中也遇到过完全一样的情况。试着挑取下来，根本不会增殖，后来发现是成纤维细胞成团出现的结果。

pjlsyz

回复 bubble_w 的帖子: l/ h! Q$ R; H3 D3 [6 ?

" F3 i) D2 i( q" s* d; Z5 F3 j出现这种情况是初始细胞过多的原因吗？

bubble_w

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, g1 j8 X/ \4 t- t5 J- n0 B7 w
2 [  Z- Z3 q3 `6 h9 r! }不是，还是重编程因子不给力。换句话说，就是重编程基本没启动，或者启动后各因子表达不平衡，比如Oct4表达低。我们之前出现这个问题是病毒包装的问题

pjlsyz

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; z4 w: _2 Q2 n0 o, `* T8 u
3 N7 ?+ e2 l; {' R9 k我准备重新再做一遍，那主要注意些什么呢？

bubble_w

回复 pjlsyz 的帖子' }2 D" N, n. C( B( O

! x6 N$ W& k8 c8 C  v- z( w7 `建议你先做一个GFP的阳性质粒，先转入GFP，看看表达阳性率，还有表达的时间，这样比盲目做实验，出不出克隆靠运气的强。

pjlsyz

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1 e3 \8 ]: n  P3 B1 y
/ g, o- t* r6 F0 w: Y8 X. D我质粒是要的，做之前先感染293看了下大致的效率