请教一下293 T细胞的培养问题？？

亮亮燕燕

最近培养的293T细胞，发现细胞中有黑色沉积物，是什么东西呢？会不会是细胞传代次数高了的缘故！

lipd09@mails

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& w  ]( ]7 ]' N- z7 C8 Q我最近也在培养293T细胞，在没有加质粒之前，细胞密度较低时，镜下也能看见一些黑色的点点，但当细胞密度高时就没有。我认为您先确定是否为菌污染（培养293T细胞不可以加抗生素，可能容易发生污染）。如果不是，应该不会有太大问题。加了质粒后，镜下就能看见细胞有许多黑点，我想这是质粒包装的病毒吧。

yaolinzhang

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8 L4 [3 u$ O6 o8 f
应该是代谢产物，楼主的细胞估计代次有点高了

漫步云端0511

可能是细胞碎片，也可能是污染。做下hochest染色，荧光显微镜下观察看是否污染。

dallashine

首先确定黑色颗粒物是在细胞中，还是浮于细胞表面。
5 ^- K" A6 H4 Z5 D0 `( @; I) V; F若在细胞内就应该是细胞状态差的表现，有可能是传代过多，也可能是细胞培养条件差（如，血清质量差、培养基pH异常、消化过程有问题等）造成的。4 C- V' ~' R; |* ?! o( n+ t" g
若在细胞外应观察细胞悬液中是否也有颗粒物，可能就是污染了或细胞代谢严重异常，建议弃掉。

亮亮燕燕

多谢大家了，我用的血清是GB的，培养液也会买的现成的。我也觉得可能是传代多了。细胞状态不太好了！

SSRSQ

我以前养也会看到一些黑色的点点，那些不是污染，应该是细胞生长状态不是很好（纯个人推测），不过没有影响后面病毒的包装。

孤野知—少帅

细胞状态不好不一定表现为是否有黑点，我养293T时也出现过黑点，第一次出现时我猜测是皿底或皿盖印迹，后来传代换了皿发现有时有，有时又没有了，但是293T的状态挺不错的。而我养其他细胞（猪的成纤维细胞）用同样的培养基也有出现小黑点，但是从培养基来看应该不是污染，而且细胞状态也还不错，所以我推断可能是细胞代谢产物吧

syacr

我之前也遇到过这种情况。观察下这些黑色颗粒是否运动，如果是在做布朗运动，可能是染菌了，但是发现及时，把细胞状态调整好是没有太大的影响的。
( o  s* X; p5 R4 w- a# P  n我之前还特意查了这种颗粒，这些颗粒做布朗运动，通过胞吞作用进入细胞，在细胞内侵染细胞，此时的细胞会出现很多空泡，最终是细胞像蜂巢一样全都是空泡。然后细胞死亡，大量复制后的黑色颗粒离开死细胞，做布朗运动，找下一个细胞。
3 s) ]* B. J. _7 I% C一般这种颗粒有2种解释，有的说是黑胶虫，有的说是支原体。我之前遇到后，买了支原体清洁剂，发现有明显改善。
$ G: p$ A# M3 U8 D/ y; p希望对你有帮助。

亮亮燕燕

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9 Z3 R7 N2 j+ m1 a0 q) W* x. w4 p4 e3 F, B  ?# }1 ~
实在是太感谢了，我最近也发现有些细胞里开始有空泡了，难道我的细胞也是支原体污染了吗？这可就麻烦了。我考虑重新换一批细胞了。