不同大肠杆菌感受态的区别

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子2 o9 \0 U: B4 V' d7 }

% ~+ u5 N& t; b3 O嗯，用的慢病毒载体--PLKO，用StbI3转化时不长，用TOP10长了好多，但没有阳性。

zm19900508

回复 wf78365421 的帖子+ M) d8 Q% o) d4 D$ t- O7 P
- T; c% C; u. }; v
师兄说慢病毒载体最好不要用DH5a,很容易发生重组

老十

回复 石山巨石 的帖子
3 M. l5 i+ g- q+ m- W- W" A* M  q$ r4 }; @  u# R
只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子
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只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子% S% p( T3 ]. e& U& q7 F! W1 t. P7 U+ {
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只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

晕，点了三下就回了三次，谁能帮忙删了多余的吧。

weiyepan

回复 zm19900508 的帖子
3 T% @8 j/ r4 N9 o9 J  V; Z& p: G) r. b4 ~# B
Stbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。
" y3 p" o: o" {; M7 O: y6 {1 p/ Y4 A要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

zm19900508

回复 老十 的帖子7 x7 i  Z$ K% J. b8 N
- W: Y! i. }/ Q& t3 Y# F. h
哈哈，找细胞海洋？

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子& u" L" i! G/ V/ [3 m8 M

6 z% P1 w( t1 q/ p6 y/ m什么是PNK再连接，为什么要做PNK再连接？呵呵，麻烦啦

weiyepan

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。