不同大肠杆菌感受态的区别

zm19900508

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+ I! ]' T+ a6 J6 R$ ^5 c$ `* U) _' q
嗯，用的慢病毒载体--PLKO，用StbI3转化时不长，用TOP10长了好多，但没有阳性。

zm19900508

回复 wf78365421 的帖子
0 Y1 l7 n) Q6 X9 N" S1 T2 s
& O7 d6 y) c' T. L师兄说慢病毒载体最好不要用DH5a,很容易发生重组

老十

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3 @' T, Y2 E9 E5 g+ I: x
+ `  s! L( E* ?/ |. V% }7 [只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

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9 S" |2 ^' R5 h  x: Y3 }
+ ?; m/ E. Z+ v% Z0 J9 G# D只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

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7 V8 ]  i# E7 R7 |0 v% y  E  t$ h# J3 P8 @& `/ V. @8 c/ C4 L
只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

晕，点了三下就回了三次，谁能帮忙删了多余的吧。

weiyepan

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$ P; T+ Q, D7 V9 e$ N  e8 e5 b7 D. Q) N, x/ s
Stbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。
+ X: o8 n2 T+ O4 z5 Z# j' J) A) u要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

zm19900508

回复 老十 的帖子( ^# V$ N% C( g1 }4 a% ~" U6 }( n8 l

7 u8 x! F6 t7 p8 {- ]& D哈哈，找细胞海洋？

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子0 a, W/ n, Z" ~7 Z% `* S6 [! X

, V8 y; c  B$ P! }什么是PNK再连接，为什么要做PNK再连接？呵呵，麻烦啦

weiyepan

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。