发一个造血功能重建实验的方案，请指正！

ciweiyuan

细胞移植前的24小时，用325 cGy 半致死剂量处理8到10周大的小鼠，同时腹腔内注射CD122抗体（ 1 mg ⁄ mouse
" S# {3 Q' D7 H+ }- X! @  \+ v），把造血干细胞通过静脉注射的方式打到小鼠体内，移植6到8周后，处死小鼠进行造血功能重建的分析。

FreeCell

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？% m8 p" D; o  v' |# u: H
2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？7 j6 B6 o* P/ A8 Y" J
3、造血干细胞移植数量是多少？+ r, ^9 n9 |) H) S! L& H3 ^
4、用什么做对照？% }1 k) p6 z& q6 S8 i
5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？
. M3 ?5 [8 I3 C% D. \7 U( r) z6、用什么指标评价移植是否成功？

ciweiyuan

1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？4 p+ [7 ?' J9 {' o4 F, c& y7 N. T
是的，这个是我没有说清楚
( N- a2 x& X/ t4 f! p  j2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？( X2 E) }  u+ Q! q  l
这个是我从文献上看来的，希望有经验的伙伴们给些建议- h4 A; B6 P; }/ B* U9 M
3、造血干细胞移植数量是多少？
0 r! l1 e" n6 D, o8 R- {5 r& A我想10的6次方是否够了呢: |5 s- Z7 F, L8 g
l4、用什么做对照？9 l* F: Q) G0 t0 Y7 d1 c( d( H! X
培养基可好; l0 I2 K7 ~/ [3 `6 y2 Y
5、腹腔内注射CD122抗体目的是什么？1 Z: P% N3 o" ]
中和抗体？文献上看来的+ _4 R8 y+ u5 l( j8 y# e( O
6、用什么指标评价移植是否成功？
4 I" d$ b" v$ _+ U# l& p取骨髓中的细胞上流式鉴定cd45，cd19，cd90？
9 z) `/ ~( b. w5 k/ _才疏学浅望大家多多帮助。

各输己键

ciweiyuan 发表于 2013-12-11 14:12 % L2 U* s8 i9 d- ~3 U
1、应该用NOD/SCID鼠造模吧？+ {. y, Y4 }4 w
是的，这个是我没有说清楚
+ A5 _3 r  r$ c  m; E) D# X2、移植前24小时照射是不是让小鼠等得太久？

. V% ~3 ?# `4 P% x2 p文献看的很好，几个问题值得商榷。
& E. U( W% z. r# _1. 这个小鼠造模的干细胞来自何处？人还是小鼠？
+ R8 q0 L4 k* ?" n! r$ u2. 24小时说来应该是相对最为规范的了，4h、6h、过夜都是常有的方法，但是不少学者认为6h这样的处理方式可能出现细胞因子风暴引起供者细胞损伤。
9 p  c9 L% d0 S7 f2 J$ K: v3. 10的6次方应该是很大一群了吧，做造血干细胞的单个干细胞都可以进行移植，如果按照这个标准的话，10的6次方恐怕会把老板打哭的。' A7 i6 y: f) `6 t$ S
4. CD122，干什么用？IL-2β链，清除NK么？为何不用pk136或者NKp46抗体。

ciweiyuan

请问你们常说的造血干细胞是指什么，我默默的把cd34阳性的细胞认为是干细胞了

ciweiyuan

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" k/ e7 H9 ^% B" w% m- A2 \7 ?. C% o2 V2 K- K6 l9 N: Q
什么是细胞因子风暴？ 一般移植要用800-4000个造血干细胞吗，很是迷茫，望指点

crazytime

回复 ciweiyuan 的帖子0 g# S8 f* _* a" y7 i- [% l# R
3 M4 @5 f$ P! x! R$ T" D' |* X' N. f3 D1 Z
我觉得数量应该根据体重来，对照用培养基不太好吧
+ e/ M8 A( A5 y7 w9 F

ciweiyuan

回复 crazytime 的帖子: @* Y( s  H5 D  N
  R7 ^8 o  f4 f& O2 J5 F
可能pbs更合适一些

goblinwang

% H' P1 d0 {  i8 e" X

" {# O1 p1 l9 J2 [% Z* p* q' _对照应该是用不加因子，不加血清，不加双抗的基础培养基，比如我用的IMDM，移植的时间选择，我觉得辐照4-6小时内进行，比较好，至于腹腔注射抗体抑制免疫排斥，我没怎么注意，致死剂量照射，免疫系统基本都缺失了，不过我移植实验最后存活率只有50%多点，不知道其他细节是不是产生了影响，如果你有好点的意见和方法可以共同探讨，

ciweiyuan

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) v$ l- J  c3 v3 F' ^1 E$ S. j4 y: a1 R# |
存活率低是否和辐照的剂量有关？，你一般移植多少细胞量呢