关于神经干细胞原代培养

limeiying

请问，有做过新生大鼠脊髓/海马神经干细胞原代培养的吗？大家都是采用什么方法制备单细胞悬液的？单纯的机械解离还是胰蛋白酶&木瓜蛋白酶&Dnase?起始接种密度通常为多少？

zb_ming

刚开始做的话最好各种方法都做做，一来练练手，再者自己也可以对各种方法做个对比。因为每个人做实验的习惯水平或者说喜好不一样，不好说那种试验方法最好，唯一的评价指标就是实验结果的好坏。这个方法没有金标准的，要靠自己摸索，然后不断改进，是一个动态变化的过程。这几种方法都有人做的过，也都有人选为自己认为最好或者说最适合自己的方法。我之前是采用的是机械法，因为胰酶消化的浓度和时间很难掌控，如果楼主摸索好了时间和浓度，那么这个方法也挺好的。可以说，每种方法各有利弊或者说各有优缺点。消化法除了时间和浓度的完美结合点难以掌控外，我也担心过对细胞有损伤，毕竟是个消化酶；当然，它有自身的优势就是制作单细胞更彻底 ，效果明显，确定是除了不好摸索浓度和消化时间完美结合点之外就是对细胞的损伤了。机械法 与之对比效果反过来便是。当然，每种方法楼主在做的过程中还是会根据情况不断改进的。所以说，用什么方法没有定论。还是建议楼主都做做，对自己有好处的。

limeiying

回复 zb_ming 的帖子! L& u! c2 ^9 E7 Q: a
! [* d) k. \+ q+ k7 _, Y8 D
谢谢，你说得很有道理。

碧落

0.25%胰酶，37度消化15-20分钟

tangyvhuang

学习了，受教

sc-cxw

机械法解离后过40μm筛网即可，方法简单并且细胞损伤小。

ss安雅熙

我做的是新生鼠的神经干细胞培养 取海马组织减碎后  用0.125%胰酶/edta消化15分钟（以前曾探究过用机械法消化，但是对于新生鼠效果不好，胚胎鼠用机械法效果不错，因为胚胎鼠脑组织比较柔软） 用DMEM/F12+10%FBS终止 终止以后离心 加培养液重悬浮 接种密度10的6次方 放在25cm培养瓶子里 培养个4~5天就可以传代了