人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

回复 willow0711 的帖子
4 H1 X9 z$ [( ^6 q& D" ]
# h; R* L# o) {* V4 o8 t- j3 M) Z1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；
& r1 a4 m4 `: ~0 P. w, n2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
, j5 R) S' D. u& ^% y3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

回复 willow0711 的帖子
+ Y. ~: [, J# K$ b- c& b; E$ o3 s; U  A; X% Q; C2 ]3 Z: H3 |
1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。
; l) f0 R  f- K7 @2 N3 L2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

回复 zhangshich 的帖子, E, @* p; o' n* R+ K3 L

  O6 ?. v& }4 n2 v' X5 H. x哦，谢谢
0 A+ v" W9 w. e0 q那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

回复 xuyang0317 的帖子  l7 `" V- a" F  H* z( w
* C( Q/ G, }8 v, ^) P& \
哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。
7 G. T" v- C4 T- o: I. X% Q7 z9 |* _0 o 以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

回复 willow0711 的帖子
( i0 B  Q$ b' V0 ~2 m, F
  f3 X& K' g5 c6 }- X: b1 f5 Y$ \洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

回复 willow0711 的帖子
2 V8 Z3 Z0 @  L1 H  i; I' Y9 B; U( k5 r! i# J6 {, J
一般7天可见细胞

luyue6453

回复 单个核细胞 的帖子# Z) y. t# U! R0 `. l% W
7 O8 U; e6 Z' }# w3 [
你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

回复 18943340581 的帖子
( v2 J0 N1 F5 N2 v9 ]  k
* c& R) Q: ~) j! j" M你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

回复 luyue6453 的帖子
& a' O( ?. b' C% r. O4 Q4 f- k- X9 n3 Y
从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！
' }" T+ p( K0 a, [/ Y; O7 q' ^$ J
! ^' ]4 Z( B% n: l完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。