人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

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1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；
- i4 t3 l  {7 K  v- S2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；$ `) H- n0 c* b! l& s* ~8 b
3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

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" s6 x9 H9 M. Y6 b9 `# P% v* P& |3 @% r
1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。5 X* y6 C* q- {
2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

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, w% x0 W; U3 Z哦，谢谢( [$ o4 D/ o8 B
那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

回复 xuyang0317 的帖子3 \6 Z* R3 b/ S- `# `, `  e& N

9 c4 |% t( F' Z$ I, c, L' d* G哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。. Y0 B4 s# D5 b
以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

回复 willow0711 的帖子- ]/ T5 Z2 W9 Y  F7 u1 M* I: v/ L

% G) [0 \7 x3 U5 Z洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

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  S7 y  D& H, e7 q
) f; D0 K5 }9 z% H一般7天可见细胞

luyue6453

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" `3 h# L/ c) ?' \  V# w& V. ^2 V7 J8 n% t5 b3 P4 }; v' e
你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

回复 18943340581 的帖子3 m$ V- e9 z4 f* w) p8 M' H% g
8 `, e: R7 l$ m' f5 I4 h
你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

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" j6 E. B7 d- z6 F
/ Q; k: q' _/ K从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！
& c$ _! z% d5 c8 W0 @
- ^' ~. C5 S" g& {7 q: s5 [  h完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。