人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

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3 j1 J& E; U( \1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；
! I. S; |0 s. \" ?* ?2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
/ N3 ^% N: ?4 b+ T8 a) p7 ~3 t! R3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

回复 willow0711 的帖子" }3 N9 ~! [; u5 u

$ D0 l' v2 n9 d+ Q7 x: G1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。  x: D# N8 c0 M& s4 O) U
2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

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# v. u% F& D" r6 I- q+ C- P+ g' C; Y! e+ a
哦，谢谢
+ S3 D1 t4 y1 I4 T那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

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2 |# s3 ~9 w7 l8 Q3 y( B6 a( g; [9 h) {7 m% j2 r
哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。
- ?1 [0 }, r# F1 J" n+ B" p, N2 q 以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

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5 i3 i$ R1 D/ V1 {( A+ ]
% ^' a, a* c4 J洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

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- a, G0 ]3 J& n0 C' d+ }, e8 S$ [
9 k( |5 r. ?, y8 o一般7天可见细胞

luyue6453

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! g9 M+ K6 O/ O6 }$ Q
你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

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  }0 @1 ~# x5 x" a) H
4 ^4 `& ?# O4 z. q你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

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. {- l  |5 x2 ^$ L2 `( m5 G7 O% {从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！( ^( P7 u( [7 p+ o7 J/ d" X
! R7 f# n% o; A  `' q' p
完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。