人脐带植块培养清洗换液的问题

xuyang0317

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& I- H; X& @& n: y  c, J
4 H+ {5 H0 F, q! \: H& r1.将脐带去血后用pbs洗2次后尽量去水后再剪碎，洗涤后水分较大，不利于组织块贴壁；7 k5 U9 T+ @# T/ j
2.细胞能不能爬出来，我个人觉得最大原因是个人体质的原因（分离了2年的脐带经验），其次就是和您使用的培养液有关系，跟你有没有洗涤没有多少关系；
, ~& ]  ?2 @' G2 S: d3.组织块贴壁放入培养箱3-5小时后，直接加入含10%的FBS和EGF培养液，放置3天后观察有没有污染，没污染的话6天左右就可以看见少量细胞沿组织块周围爬出，这时候可去除组织块，全量更换新鲜完全培养液，再放置3天左右，首次传代即可。

18943340581

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  c6 t: \: r' `; z" {# l8 ], l4 ~' m# e# K/ p! y
1. 得到华通氏胶后，如果没有残留的血液就不需要另外冲洗了，但是如果有血液一定要将血液清洗干净，不然血细胞会影响间充质干细胞的生长。
9 X' h# `* c$ {2. 我们实验室目前是 铺完组织块24h后 补4ml/皿，我们用的是100mm的皿。之后每隔3天半量换液一次，一般7天就能见细胞，16天左右就可以收集细胞了。

willow0711

回复 zhangshich 的帖子
& a: O1 v; s( Q. l/ O
% A+ G+ |. R  v) m+ a& }' o哦，谢谢1 Z1 ?6 `2 @: f2 n# {
那您做是大概多久可以爬出来?多久去组织块？大概多少天可以传代

willow0711

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8 Q2 D, S" G/ D5 C* w- `4 u% A0 i& g2 @+ c1 x
哦，谢谢

frankhu

把华通胶剪成一平方厘米大小，均匀排列到培养载体底部，用少量的完全培养基浸润，避免组织块漂浮。放培养箱培养3个小时后，再补加培养基至刚好浸没组织块，放到培养箱中继续培养三天后全量换液（不要用平衡盐溶液清洗），首次换液要避免组织块被吹起来。一般一星期左右能看到组织块周围能看到间充质细胞爬出来。待细胞长成比较明显的区域性生长后，可以把组织块洗掉。待细胞长到80%融合后，消化传代。- C; c9 O$ L0 a
以上是本实验室使用的脐带间充质细胞的分离方法，仅供参考。

deshenglll

回复 willow0711 的帖子; E3 _; m9 E$ G7 S4 F, x

! `/ x& V6 h/ C& Q8 ?+ z洗个一两次就行了。换液最好全量换液。

mtdj1314

回复 willow0711 的帖子2 ?. J4 Y: S& T' b  f/ Q  i
. ^; n/ b$ B, U- E8 I+ Q1 O9 U+ x! b
一般7天可见细胞

luyue6453

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+ O6 S4 s. H5 C* H" P2 t: G3 M
5 t  x9 [7 s! {8 ^; c你这细胞形态真好，不知道你需要多久能长到第三个图片那么多细胞，第四个是传代了吧！可以推荐一下培养液吗？

luyue6453

回复 18943340581 的帖子9 u: b5 f/ w8 Y9 f  S% [& \

9 t' @' q0 p2 U- W' S: X" o5 i2 `2 [你们是拨完先把组织块种到皿了？那么一条脐带种几个皿啊？等24h后再加培养液4ml的意思吗，还是种的时候就加了一些培养液？

单个核细胞

回复 luyue6453 的帖子: |- z5 Y/ @% n3 ]: e' o

  @9 Z' Y3 ^; s% U3 S2 [* E从统计来看，没有添加任何细胞因子的状态下，15天左右可以长到如第3个图片（即大部分贴贴组织块周围局部细胞成致密状，第3个图片中的组织快已经脱落），可以进行传代培养。若是添加相关细胞因子，应该可以更快吧！3 V, r+ i( Y2 w

" F/ `. V& v. c' Q7 Y完全培养液为90% DMEM/F12（1:1）+10% FBS，均为市售商品化培养基，可以参考Gibco或者Hyclone的官网。