肿瘤干细胞球传代时需要用胰酶消化么？用什么浓度的胰酶呢？

lingli318

我养结肠癌干细胞成球之后需要传代，我用0.25%的胰酶-EDTA进行消化传代，结果消化之后长不成球了，不知道怎么回事，后面又养没有用胰酶直接吹打传代细胞球又吹不散，不知道怎么办，求高手赐教

涅炎

回复 lingli318 的帖子! r: y' L- m8 I5 }

7 M1 w* [% _2 M. o我觉得你用的胰酶太多了。我自己养的细胞球多吹打几次，一般可以吹散，可以稍加一点胰酶，具体需要自己摸索，培养基里可以稍加一点肝素和氢化可的松，我原来加的肝素2u/ml，氢化可的松0.5ug/ml.

zb_ming

首先，刚开始做的话，胰酶浓度腰线从低浓度开始使用，建议你用0.125的，你这个情况明显是消化过度，细胞损伤严重。另外，你使用了两种消化酶，这样的话浓度应该更低一些。再次，不知道你消化的时间是多久，像你这种浓度一分钟左右应该差不多，不过也要根据细胞密度和被消化的难易程度来定。综上，这个消化是要摸索出来才行。比较灵活。楼上的建议也可以采用，如果铁壁不是很牢靠的的话就直接吸管吹打就够了，不过也不弄过度用力和吹打时间过久，这样细胞也容易受损，凋亡或者死亡。总之，养细胞是个麻烦活，尤其是养干细胞，更要细心、谨慎、用心、刻苦才能有所收获。楼主加油！

jinghui521521

我也是用的0.25% EDTA的胰酶，有时候也会感觉再次成球的时候成球效果很不好，我听说有一种特殊的消化酶，不过我没用过。

lingli318

回复 涅炎 的帖子7 ?$ S8 D' C' h' {

: L6 q0 U2 @1 ~: r6 r; n0 f+ c+ Z  b谢谢你，你养的细胞球长的好么？我看有的文献里面培养基里还要加胰岛素和牛血清白蛋白，不知道这个是不是必须加

lingli318

回复 zb_ming 的帖子' O# ~- `  {, z5 ^& p8 {

2 J+ ^) o/ M% Nhandshake，谢谢你，我现在都已经摸索好久了，养了几批都是刚开始成球的时候好好的后面不是变黑黑的团一团的就是贴壁了，郁闷啊

luyue6453

回复 lingli318 的帖子* ?) w$ l/ E' M7 M  A( e
/ j; j8 E/ \( m5 Q: I+ e& U
嘿嘿一团是不是死了？

zb_ming

你可是同时试一试几种方法，比如直接吹打不用胰酶消化，当然这种方法细胞散的效果没有消化的好，但是，对细胞损伤的程度相对较小，如果不影响你的后续实验（比如流式检测）的话不防使用这个方法。其次是不同浓度和消化时间胰酶消化的使用。如果细胞不是太难分散的话，我的想法是微量胰酶结合吹打试一试，效果应该不错。

lingli318

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% g5 X: E( z6 v2 e5 O
4 B; p; \8 [! l1 M9 t( w- m3 k. ]4 A好的，太感谢你了！

maiweiqian

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7 |5 s+ x# X6 \9 b9 a
, x+ X9 k& s& E7 @8 s1 K我用0.05%胰酶，觉得细胞是没死的，不过消化之后再长出来的球就没之前的球好看。你试试accutase消化看看。