sf9细胞贴壁培养后如何传代

yiyeqiu

最近新购买了一支sf9细胞株，复苏后直接进行贴壁培养，发现细胞贴壁非常紧。传代时直接用手拍培养瓶，基本上看不到细胞脱落！改用手拿细胞培养瓶朝着超净台拍，约8-10下，也只能使很小一部分细胞脱离甁壁，看到这种迹象后，用玻璃弯管也要吹打很久（约10min）才能把细胞基本上吹落；同时在这之前尝试过一次加入胰酶消化后用玻璃弯管吹打，感觉还是贴壁很紧，亦是用了约7-8min才将细胞基本吹落……而上述的操作都对细胞造成很大的损伤，细胞活力降低到百分之六十左右！且细胞传代后出现大量的细胞碎片，还有部分细胞继续鼓胀死亡，漂浮的细胞也很多，活率太低了~~（奈何显微镜无法拍照，只能附图为从ATCC上找到的，我的细胞吹下来有小团块和碎片，但是2-3d后长到一定密度比图片看起来状态好得多）# Z9 u/ n9 @" O7 ^9 S8 e  B
求有经验的前辈指导和分析，如何对sf9细胞进行传代比较合适（例如吹吸力度的把控等小细节），这张图片上的细胞状态就算是很好的了？感谢！

johnkye

建议用胰酶（0.25%)-EDTA(0.02%)溶液消化，细胞之间是通过CAM（细胞粘性分子）相连的，而很多粘性分子只有在有+2价金属离子。在胰酶中加EDTA的作用是熬合这些二价离子，使细胞被消化成单细胞形态。消化时要放置在37℃环境中。

184lj

我也是用拍打的方法传代的，我看你养的细胞密度太高了，我90%汇聚的时候就传代了；当然了不是所有的细胞都能够被吹打下来，多少会残留一些。

wf78365421

建议用胰酶（0.125%)-EDTA溶液消化，这个比较缓和。消化5分钟左右即可