求教：CIK细胞可否冻存后在复苏给病人用

星空雾雨

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+ {6 T! b9 s; m* A" }复苏的话 多少细胞一瓶 浓度多少，还有复苏后直接加在1640培养液中离心吗？

lousia04306

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一般放入程序降温盒中4℃预冷一小时，转入-80℃冰箱至今程序降温过夜即可。

月_幻影

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1 m" |- a* `- Q/ I& j
# M1 U) ^/ y% o3 R8 S5 T“多少细胞一瓶”是什么意思呢？你是要继续培养还是冻存的时候啊？复苏时我们一般是加在生理盐水中离心的。。

tanrufu

培养好的CIK细胞，用-80冰箱冻存1个月复苏使用，我们做过测试成活率一般都大于90%，如果是-80冻存过夜转液氮冻存其保存时间会更长，活性也越高，半年取出来测试一般大于95%。当然建议冻存细胞短期内复苏使用更好。细胞液：血清：DMSO=5：4：1，一般做临床都是细胞养到18天到20天成熟后再冻存，复苏后用生理盐水洗两遍回输即可。

星空雾雨

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7 w9 ]) _& u/ M  G细胞培养多久后冻存，复苏之后重新培养是怎么操作的  

星空雾雨

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8 H8 G2 x$ j  }* @9 z冻存用的血清是胎牛血清吗？里边有DMSO直接输会不会有什么不良反应

花饶然

感觉目前好像还未发现有很纯熟的方案来冻存CIK后，再使用的。以上所说的几种冻存方案可能适用于大多数细胞吧，但不一定适用于CIK的，如果冻存后特异性标记和肿瘤杀伤活力都未发生明显变化，到是可以的，不知道目前有多少人研究这个，其实这也是个很有意义的方向，可以趁人在健康的时候甚至是肿瘤早期来提取，以便后期血液质量不高而导致细胞难以培养。楼主可以接着探索下啦，恭候佳音。冻存液的成分方面估计得深入摸索

月_幻影

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一般冻存时会选择处于对数期的细胞，可以观察细胞的生长情况确定，当然也可以根据你的需要而定；关于复苏：复苏时要迅速放入37℃水浴中，并不时摇动，在1分钟内使其完全融化，使之尽快通过最易受损的温度段（-5～0℃）。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好，然后在无菌下取出细胞即可。在1000r/min速度下离心5～10分钟（转速应该是不为一，我们一般用1600rpm），弃去上层液，加入适量培养液后接种于培养瓶中，接种浓度1×109/L（接种密度可根据你的需要酌情计算），置二氧化碳培养箱静置培养，次日更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，记得及时进行传代操作。

星空雾雨

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谢谢 非常感谢！因为我没有流式细胞仪，没办法检测对数期，一般培养多久后细胞进入对数期，告诉我个大概的时间段吧

18605313076

可以的，好多文献也都有报导。冻存液就是FBS：DMSO=9:1，冻在-80应该一个月没问题，冻在液氮一年内没问题吧。不过最好是现用现做，细胞活力比较高。