急问！人胚胎干细胞H1复苏问题

lsunnyshine

我养的是人胚胎干细胞，H1，之前复苏传代都没有问题，前一阵子在外地做实验，自己冻存了一批细胞，回来的时候是用干冰带回来的，放在实验室液氮罐里，最近复苏了几次，每次都是什么东西都木有，活细胞、死细胞、细胞碎片，什么都木有！！！！！！！！！！！！请教大牛，这是什么原因啊？郁闷死了，5565555

ciweiyuan

1.考虑冻存时细胞数量是否偏少# }- I' @, `1 |# v4 ]6 g
2.建议多养几天观察，可能是冻存时细胞消化的太小形成了单个的细胞导致的9 q$ w& a% e" n! L

lsunnyshine

回复 ciweiyuan 的帖子) s1 B. _4 q. c/ s5 C$ o6 D
  g5 Q" D7 w" R) T7 e8 B
细胞数应该不会太少的
# T; G* _8 \1 M/ \# \. ^  G即使细胞少，会离心之后什么都没有么？单个细胞在显微镜下也可以看见的吧？我现在碰到的情况是根本看不到细胞，之前试着养过，还是什么都木有。。

watchen198891

第一：你冻存的时候是不是克隆团块太小了. {" P* p/ p" j* O% K
第二：你冻的时候是不是方法不对
: \* Z9 P# Y0 i) s8 \# b* L, V+ u8 O第三：你复苏的时候是不是过分的吹打了，细胞团块太小了，太小的话会造成你贴下去就直接分化了（你可以观察一下你饲养层是否是变得致密了来做出这个判断）$ t  z8 ]( |# q4 n; {
第四：一般干细胞复苏以后都是要三天左右才能看到明显的小克隆

plainxie192

怎么会活细胞，死细胞都没有呢，重复操作了几次，不会是解冻过程倒掉了吧？
( B$ z. a: R6 H! w- a解冻后添加rock inhibitor培养能增加存活率

Emma1986

如果你是放在饲养层上培养的，那有可能就是分化成了类似于饲养层的细胞，在平常的培养中分化的可能还是有的，如果有条件的话，建议做无饲养层复苏，用matrigel包板，mTeSR培养。

yeungfan

保存的话不是要用程序降温盒在-80过夜，然后才放液氮的吧，你-20保存直接放液氮可能会有影响