贴壁培养NSC后，加化合物进行分化后，细胞聚团怎么办？

碧落

贴壁培养NSC,第二天加化合物，同时撤去生长因子，进行分化。后进行免疫组化，发现细胞总是会移动聚团，形成网络状的结构。接种时，细胞是均匀的。+ }+ Q* q1 A& e: Z
请问大家有出现这种现象么？怎样予以解决呢？因为细胞聚团，导致细胞重叠而非单层，会影响后期的图像分析~~~

afei198520

我也碰到过类似的问题，请问你用的包被试剂是什么？包被程序？有可能是孔板包被的问题。

碧落

回复 afei198520 的帖子  f$ ^* w) G9 m0 o

7 l6 c; g% C9 [, I% i2 S9 e! \谢谢回复~多聚鸟氨酸+fibronectin。正常培养的时候不聚团，分化的时候才聚团呢？5 p/ r8 l- n/ M2 [8 I+ \
请问你有什么好的包被方法么，欢迎多多交流) [* J/ b) D' D( P% T

afei198520

回复 碧落 的帖子8 z4 X/ _9 W9 b: j1 p- O0 ?
8 h7 C) U& F- r# e; ]
现在我只用laminin包被，基本上不会出现什么问题。另外我觉得你可以试试NSC接种后让细胞长两天适应一下再进行分化。

jojo1988509

NSC不是本身就会出现长多了就向上长然后就像团状的情况么？

碧落

回复 afei198520 的帖子5 ~. q6 f  B8 E3 i' J* Z* c$ W
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嗯，适应两天再给药会稍微好点，也是时好时坏的。请问lamin包被的具体条件是什么？多少浓度，包被多长时间？什么溶液？谢谢……我想试试

angelyannan

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9 U! D' c+ Y6 z( X4 l本人买的是sigma的，用无菌的PBS配制，然后你按照说明书的浓度和包被时间，包被条件操作就好了