贴壁培养NSC后，加化合物进行分化后，细胞聚团怎么办？

碧落

贴壁培养NSC,第二天加化合物，同时撤去生长因子，进行分化。后进行免疫组化，发现细胞总是会移动聚团，形成网络状的结构。接种时，细胞是均匀的。
% K7 P) S2 n0 F" j" u" u请问大家有出现这种现象么？怎样予以解决呢？因为细胞聚团，导致细胞重叠而非单层，会影响后期的图像分析~~~

afei198520

我也碰到过类似的问题，请问你用的包被试剂是什么？包被程序？有可能是孔板包被的问题。

碧落

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谢谢回复~多聚鸟氨酸+fibronectin。正常培养的时候不聚团，分化的时候才聚团呢？
/ e/ K, i- y* m% V请问你有什么好的包被方法么，欢迎多多交流
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afei198520

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6 Y, U" g7 n4 n  b) S' Z现在我只用laminin包被，基本上不会出现什么问题。另外我觉得你可以试试NSC接种后让细胞长两天适应一下再进行分化。

jojo1988509

NSC不是本身就会出现长多了就向上长然后就像团状的情况么？

碧落

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嗯，适应两天再给药会稍微好点，也是时好时坏的。请问lamin包被的具体条件是什么？多少浓度，包被多长时间？什么溶液？谢谢……我想试试

angelyannan

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5 r* ^% O1 s: E& H0 M/ n/ k2 I. ]& N* F* ?! b9 ^
本人买的是sigma的，用无菌的PBS配制，然后你按照说明书的浓度和包被时间，包被条件操作就好了