求助 文献中说的阿利新蓝法测GAG 详细怎么做？

bty007

阿利新蓝法测定培养液中GAG 含量。定量接种6×106个细胞于培养皿，每周传代1次，留取所有培养液进行检测。吸1mL培养液，加入1.5%阿利新蓝溶液1.5 mL，室温放置10min，480nm比色，根据4-硫酸软骨素标准曲线求得样本GAG含量。3 [* {+ N& A# ?4 u+ g0 S
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好多中文文献中都有这句话，但没找着说的详细步骤的，: e+ m$ {4 `$ n0 t
比完色用的硫酸软骨素标准曲线是什么？1 H  E5 M/ i9 i+ I
有专门的阿利新蓝测GAG的试剂盒吗？还是只是普通染色用的阿利新蓝就行？
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谢谢7 W* M9 z2 W- M

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zhen022

这个之前做的是组织学染色，试剂盒还真没做过。不过你看看有没有试剂盒，如果没有，我觉得你可以自己探索一下了！7 z* V! s4 b  A  i9 X. C& d
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首先制备4-硫酸软骨素标准品，这个网上有，稀释不同浓度，测曲线；不过这个480nm不一定靠谱，你可以先用一种浓度全波长扫，看看峰值在哪里（如果不嫌麻烦，每个都扫全波长，或者特定区域也行的）。
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5 F, E2 Y# k; C# _' V$ H记住Alcian Blue的配方要明白，最好找到确切文献，因为我之前陪液体都要加入冰醋酸 ，麝香草酚 之类的 ，不知道吸光度的测量配方是啥！2 k- {! G5 W- ]3 n& K( S! V, O
可以参考：http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/00032697799006179 `3 X) n0 J4 X& N
http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/0147651383900775