已经形成的肿瘤干细胞球如何分离出来？

默默pharmacy

我是用的无血清悬浮培养形成了细胞球，认为细胞球就是分选出来的干细胞样细胞，现在想把细胞球从培养基中分离出来之后再传代，不知道该怎么办。。。求大神指点。。。

mdbssjh

同问啊，同学你分离出来养没？

zz091115

离心收集沉淀 楼主是清华的吧

maiweiqian

用筛网过滤行不行啊？顺便问一下，楼主打算用什么方式消化传代啊？是机械还是酶啊？如果是酶的话打算用什么酶啊？

zz091115

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3 ~' I8 ?5 @4 ~/ m8 k- w2 ~
细胞系用胰酶就可以

maiweiqian

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! H% n- Q" u2 J: s3 c. u# O4 r& s4 M& ?
我之前用胰酶消化了的细胞球，打散之后，以后就不成球了，可是我用台盼蓝测过，是活细胞啊，很奇怪的现象，不知道你们有没有遇过这样的情况？

zz091115

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: H* X5 t& w) S1 `6 X好像就一次是这样子 胰酶消化不用太久 注意边消化边用枪吹 不要单独靠胰酶 那样会把细胞玩死的

tiramisu

胰酶消化离心取沉淀就行吧

wanglimaomao

还有一种损伤小的方法，就是重力作用，自由沉淀，多加点液体，球一般会最先沉淀，一旦沉淀就吸走上清，然后再重复一次，放到培养皿中培养，单个细胞一般会先粘附，然后晃动，把细胞球转移到新的培养皿，或者消化传代。我们做肿瘤干细胞成球实验的时候，一般用2型胶原酶，胶原酶对细胞损伤小，胰酶对细胞损伤太大，消化以后不容易存活。建议用胶原酶试试。胰酶和EDTA会损伤细胞膜，改变了干细胞的信号传递，而胶原酶是打开细胞间的胶原成分，使其松散，不影响细胞本身。

pengxuleo

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% b7 J, _. ?$ C( |将含有干细胞球的培养基装到离心管里，室温下自然沉降5-10min后去掉上清即可，如果觉得不够，可以重复几次。或者也可以低速离心，速度在500rpm以下，可以自己摸索一下。