练习小鼠骨髓移植

hyde

想练习小鼠骨髓移植，求高手指教4 N+ s- Z( A  y2 m" P' n" e
1，首先是收集小鼠（带GFP）骨骼，敲碎洗出细胞，过滤，离心。（几只小鼠比较合适）+ \) x- p$ _6 h8 s
2，可以直接移植分离的全部细胞吗？应为分选要好多抗体，一时半伙凑不齐？8 `3 r1 ~& R$ G. K5 [2 v4 B
3，受体小鼠可以不辐照吗（学校的鼠房没有这方面的器材，而且拿出鼠房的小鼠不能放回去的，比较坑爹，有木有药物可以杀死原有造血细胞替代辐照的）" }. ~# U( @) e/ ~% m3 U3 ~
4，射线的用量不是很懂，半致死量这些是如何确定的？
; y2 e) l6 S, U+ g9 i3 U- s5，一般辐照和移植的时间是如何确定的？/ O( m1 N0 M  E% p; s8 K  H  w
6，移植多久后比较合适看效果，是不是 可以直接通过血涂片看GFP细胞的比例就可以了？
7 v+ Y" z3 k+ }; e  F

goblinwang

" U  i9 [: }% Y9 Y+ l, N$ I: h

8 h4 L: K  R* @2 i' I7 D哈哈，通常移植都是要做清髓辐照的，药物处理，没怎么见过，带GFP的细胞可以直接分选，干嘛要抗体染啊，移植分全骨髓和LSK移植，辐照剂量一般都是9Gy或10Gy,辐照处理4-6小时内移植，一个月后不死算是造血重建成功，) q! y+ {8 p0 p9 J
具体的我可以发分参考资料给你，

hyde

; I. ^/ t2 X" `9 M! [$ P2 \) y# ^

. ]3 y3 V, b% ]5 I2 q$ P+ p3 e回复 goblinwang 的帖子: w6 a& Y$ O; {2 u6 H

/ b* n: P6 L+ P! B! X; w& H移植后小鼠可以不养在清洁级或者SPF级别的环境中吗？学校的辐照设备在动物房外面，他们规定拿出去的小鼠不能再在动物房饲养。) }0 F# I6 k- o! T0 }+ G
我想问分离的骨髓细胞比较杂，我说的分选是指要不要用造血干细胞的marker纯化一下再移植还是直接全部移植？
0 v& S* {- N& U9 ~8 b6 F谢谢。

chutu

有报道用白消安这种药物也可以起到清髓的作用，当然不如辐照方法经典。骨髓移植时分选出LSK细胞或者全骨髓细胞做供体细胞都可以重建造血，只是细胞量要掌握好。收集骨髓细胞简单的做法是剖出股骨和胫骨，剪掉两端骨头，使骨髓腔通畅，然后用注射器吸取溶液把骨髓细胞冲出来，冲干净后用注射器再把骨髓悬浮液来回抽吸几次，使其分散为单细胞悬液就可以了，最好用细胞筛过滤掉渣滓。