拟胚体在无lif培养基中培养问题

922922922

请问各位前辈，先做拟胚体培养，培养2天后，拟胚体竟然贴壁了。请各位前辈，我的protocol如下，帮忙分析一下。! H4 s! D- h! m3 R" G5 P6 q% `( n. v; O

# p. F1 `- X% @+ p' F1、正常消化的IPS细胞，制备成单细胞悬液。
; X4 Z6 b6 K3 b6 q' p( s; W2、接种于玻璃培养瓶，无lif的KSR培养基中。
: n0 J9 S  V* ?' S  H( s. a' ^3、接种半小时后，晃动培养瓶防止贴壁。
4 E3 b7 [! J1 a4、培养1天后，发现有很多拟胚体形态形成。. S2 T4 f/ {6 P; @' y
5、第二天观察时，几乎全部的拟胚体均已贴壁，并且部分的拟胚体疑似有分化迹象。
1 ^, r5 W1 J. }1 M4 J6、我之前也做过几次的拟胚体培养，效果较好，但是接种的细胞浓度比这次的小一倍。
* U: P1 {% V; K" ?# Q

plainxie192

回复 922922922 的帖子% Z2 h  |- m2 S
7 n5 j* k8 H$ v: N1 o. P
应该是你培养瓶的问题吧，反复利用的玻璃培养瓶需要用琼脂预处理才能防止贴壁，你也可以用一次性的细菌培养皿。petri皿。

ciweiyuan

瓶子的原因，要用低粘附性的才可以，否则就是要用琼脂铺板的板子才可以

922922922

回复 ciweiyuan 的帖子
' a! d& f9 ^0 p
% R$ h6 A: @2 C谢谢您，非常感谢，麻烦您能否告诉我下，用多少浓度的琼脂糖，还有具体的protocol吗？

922922922

回复 plainxie192 的帖子
+ V9 M# |( V. e, L
  [3 Y7 x/ l( t% u7 @+ R- q您好，plainxie192，非常感谢您的回复和帮助，我还想问一下，应该如何处理玻璃培养瓶呢？

ciweiyuan

回复 922922922 的帖子3 o1 ~( d6 A, S) W

0 c. c# x) z4 T: T0.05%浓度

922922922

回复 ciweiyuan 的帖子
# M+ n4 X' h& V! E7 J9 a+ {
9 }/ }5 h$ n/ H谢谢您，ciweiyuan。请问是0.05%的琼脂糖需要包被多长时间？有什么需要注意的吗？谢谢您，非常感谢！

ligangtiancai

我们实验室用的是Corning低粘附孔板