求助：胎盘间质细胞传代怎么死了

chenzhengliang

如题，之前做了两批胎盘间充质干细胞，一批（A）经过密度梯度离心的，一批（B）没有，原代培养时，发现B的细胞比A要多将近一倍左右。本想传代后B比A也要多不少，可是没想到传代后A大多数都贴壁了，没什么问题，B反而都死了，A和B传代所用的配液都是一样的，就是吹打和酶消化有点区别。B吹打时气泡多点，消化1分40s，比A长十几秒。不知道究竟哪里出了问题，求各位大侠指点迷津啊。

孙帅帅

你是用的酶消化法消化的细胞是吧，一般消化多十几秒影响不是那么大，有的时候间充质干细胞就会出现不明原因的老化，建议你还是重新养一根吧。我们原代培养一般都是用组织块贴壁法，效果还是不错，但是我们是做的脐带间充质。

chenzhengliang

回复 孙帅帅 的帖子
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好的，谢谢。但是我做的两批细胞时间都是一致的啊，不至于一个老化的特别严重，一个还是正常的吧？

flylover1221

气泡破裂可能会导致细胞死亡，尽量题壁轻柔吹打。可以在进行比对实验。

月_幻影

是不是细胞有些杂呢，就像细胞交叉污染，这种污染没有微生物存在，但使培养细胞不同种类之间发生混乱，细胞生长特性，形态发生变化。有些变化轻微的不易察觉，有的则可能因为生长优势等原因导致其他细胞生长的抑制，细胞种类杂，彼此又存在抑制，最终导致细胞死亡；亦或是细胞间的彼此排斥导致老化。而且过分的吹打和产生过多气泡对细胞生长也是不利的！

孙帅帅

回复 chenzhengliang 的帖子9 w+ Y! B) }5 i! O& q7 j3 j4 D
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前几天我们刚养的MSC就是和你说的那个细胞一样，原代两瓶都不错，但是E酶消化 重铺后其中一瓶细胞老化特别严重，直接弃掉重新养了一根。

wf78365421

正常传代细胞不会死亡。即使有死亡也只是部分死亡，不会全部死亡。建议查看一下你用的所有试剂，有没有用错的。