有人做胚胎干细胞向心肌细胞方向诱导吗？

智露

悬滴 最好是多少个细胞啊？你们诱导分化的天数是多少啊？

Jonathan

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1 b0 W# X% A( F; q搜搜前几天我刚刚被接收的paper吧。stem cells and development

yuguangju99

5000个就可以，悬滴两天，形成eb,悬浮培养，第四天贴壁培养。加入诱导因子效率会更高。

zhouhuaxizhu

我做的是400个，悬滴20ul培养2天，悬浮培养3天，然后贴壁培养，第6天就有搏动的区域了。
" T2 `. g4 v0 B+ }8 K( K个人觉得细胞系不一样，用的试剂培养基不一样，可能会有差别。建议400 600 800同时试一下。另外上海的杨黄恬老师他们认为加入抗坏血酸可以提高诱导效率。我试了一下，没仔细做。但效率貌似要高一些。

智露

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你好，你5000个细胞是一滴么？一滴多少微升啊？是不是太多了啊

智露

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真的非常非常感谢，我做的是500个，悬浮5天，你悬浮培养3天，那EB不是很小吗？贴壁之后也会拨动吗？从我做实验观察，第四天后EB开始长的很大很圆啊，你做transwell实验吗？目前我在做那个试试加GATA4，你做过没有啊？

zhouhuaxizhu

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$ c3 {' g! A8 a; D" h6 x是的， 我的体会是悬滴两天在悬浮3天效率要比直接悬浮5天要高一些。搏动的心肌细胞就是在贴壁后才能看到。EB个头我没有用标尺去量。但是一旦贴壁后就很快铺展来来。transwell实验我不懂哈，我只知道肿瘤细胞的transwell。

智露

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哦，那你用transwell是做侵袭实验的，你天天登吗？我还有问题想问你呢？你做的第6填就跳到是自行分化还是加了什么因子诱导分化啊

zhouhuaxizhu

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没有加任何诱导因子，加了应该效率会提高一些。

智露

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) I! b/ @7 I; d1 h' N: f那你自行分化的效率也太快了吧？你用的分化培养基是什么啊？这能说吗？你做过悬浮三天和悬浮五天的比较吗？悬浮培养目的就是让EB增值变大吧？三天肯定没有五天的EB大？那没有关系吗？你贴壁分化时一个孔里面的EB大概放几个啊？放多点会好吗？