用天津淋巴分离液最后离心力该多少啊

xiaostou

离心力不是主要原因，加液要缓是最重要的；刹车调到0或者一个数值；另外一定要室温，刚从冰箱拿出来就做一定效果不好。还有要注意，别同时加太多管样品，时间久了血会沉降下去，加完马上离心比较好。! z9 f. @/ Q0 W5 h, ?( ^! R  c; _
其实最根本的还是国产的效果差点，比较过进口的，分离的细胞比天津多2倍左右。
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帝国黑骑士

我们采用的是快升慢降，700g，18min 足够了 ，加液小心些不要打破界面基本上都没什么问题的。

minxianhu

第一：向淋巴细胞分离液上加血时先缓慢后稍快，保持界面分层' |: L9 _% w& W5 p$ h, y: Y
第二：离心力：我们做的实验，离心力是706g,时间20min
5 }7 B6 t9 _& u+ L: ~第三：升降速度控制：我们是调到最大，即是600
1 Z* W$ k8 m% Y5 p效果较好。

zuming

楼主说的应该不是分离白膜层的步骤吧，是分离完白膜层后的细胞收集问题。; m5 o- ~' e0 o* R9 p0 m
如果楼主出现细胞离不下来的情况肯定是吸取白膜层的时候分离液回收多了，可以多加缓冲液，问题就解决了。) @% T* O( l5 o! U* r2 C9 Z
天津的分离液回收效率估计也就50-60%

saifast00

……是水平离心机吗……？

CELL007

第一，一定要主要好加样品。是加血样到淋巴细胞分离液上时，刚开始时一定要慢，一小滴一小滴的来，看到缓缓的留下，不要讲淋巴细胞分离液冲击到；5 e& Z2 o3 c1 W: B, k
第二，加好后，一定要拿取都要非常轻柔，不可剧烈，否则不好分层；
! G" t# O' @) n6 L/ z, g第三，离心力，700G，20min；升速可以快，但是降速一定要慢，可以调节到1档或者2档；2 Z  O5 x9 {! J4 ?  |% S! I
第四，最重要的一点，看到明显分层，取时，一定要在白膜层的上和下尽量多取，为了是尽可能多取到细胞；
6 Q! t5 h6 E9 A% `( \# q! L第五，取得细胞后，离心洗涤时，这个液体的量和PBS的量最多是3:2，否则离心效果不好；4 e  `  q' [% T8 L
第六，鉴于是国产试剂，和GE的还是有差异，但是不大，（GE还有个特点不好，需要从国外进口，货期长）；为了达到更好的分离效果，可以多加，1:1。( O8 Z1 z  ]0 q3 X) I8 q

fenlichong

我们是2000rpm离心20min，使用分离液要注意：1.将血液进行稀释可降低血液黏稠度和红细胞的聚集，提高单个核细胞的收获量。3 S, X) D4 N" u, z& F
2.温度变化可直接影响分层液的密度，即影响细胞的收获率和纯度。故应在室温(18～25℃)下进行实验，分层液使用前应预温至室温。温度过低，淋巴细胞丢失增多；温度过高，会影响淋巴细胞活性。. r3 |* p5 C6 e6 f
3.分离时的转速与时间应根据不同样品作相应调整。离心速度在2000～2500r/min，离心时间为l5～20min，离心后若见白雾状细胞层中仍掺杂红细胞，应提高转速或延长离心时间，若淋巴细胞丢失过多，则应适当降低转速或离心时间。
& U0 |5 U5 T0 S8 s$ |4.分层液应直接加入管底，防止浸沾四周管壁。
4 @4 z, n$ C2 B, ^/ X- E5.将细胞悬液叠加于分层液上时务必小心，不要扰乱界面以影响分离效果。( Y- u" t8 x* ?6 L/ l
6.充分冼涤分离后的单核细胞，可除去大部分混杂的血小板。
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chimo100

每一个淋巴细胞分离液说明书上都有建议的离心力的。只要控制好升降速就可以了。我们一般升6降4，如果还是分层不好的话建议无刹车。还有就是加外周血的时候注意动作轻缓。淋巴细胞分离液使用之前注意4度保存。在吸血浆层的时候，注意不要吸到白细胞。吸白细胞层时注意要全部吸完。

yuanyecat

说明书上市400g，但是我们的经验告诉我，不同的离心机由于管孔的倾斜角度不同，实际的离心速度是不同的，你不一定用的是说明书上推荐的离心机，我建议你用试一下不同的离心速度，200g，300g，400g，500g，600g看看哪个速度最适合你实验室的离心机。我实验室用的就是500g

子非鱼

离心力我们一般就是400g，但是一般如果我们实验室用thermo的离心机，一般加速度调5，减速度调2，如果用Eppendorf的离心机的话，加减速度都会调0，一般离出来效果都挺好