关于黑胶虫的问题

指下人生

关黑胶虫 求助

孙帅帅

     黑胶虫究竟是一种生物还是非生物，本身就存在争议。有人认为是从血清中来的一种原虫，也有人认为是细菌，或是真菌，也有人认为是血清中的蛋白的结晶。“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。
' u6 a9 g# A* v4 i" C% E: L9 A' K     细胞培养的时候，有时会在400倍显微镜下看到小黑点在动，小黑点有时呈点状，有时呈小的片状，运动形式为在原地振动（类似布朗运动），这种小黑点既不是细菌、霉菌，也不是支原体（我们曾经请周守长用血平板培养过，没有菌落出现），目前业内人士称其为“黑胶虫”。
# S. K$ p- ]8 @, d* j: z     黑胶虫到底是否为生物？这个一直是业内人士的疑惑。黑胶虫一般是存在血清里的，而血清通常是经过0.1μm滤膜过滤的,所以血清里不可能存在细菌、霉菌及支原体等微生物。如果说黑胶虫不是生物，它会不断增多，达到一定数量时会与细胞竞争性生长，与细胞竞争培养基中的营养，从而使得细胞营养不足而死亡。

月_幻影

“黑胶虫”是近十几年才发现的一种细胞污染物，“黑胶虫”的分类目前尚无鉴定确认。8 z/ p+ V  g/ m: Z6 a( [
“黑胶虫”可寄生于动物细胞，也可以生存于培养基中，依靠细胞和培养基中的营养为生，并随细胞传代而传代。“黑胶虫”与细胞竞争性生长，开始时对细胞并没有什么影响，但当黑胶虫的数量多到一定程度的时候， 细胞生长就会受到影响直至死亡，严重影响了科研活动的开展和进行。所以“黑胶虫”的污染常在培养条件改变、细胞接种密度降低、细胞状态不佳时显现并使实验中断，尤其在冻存细胞复苏时可造成大量细胞死亡。
# W, T; O( s) g; I+ M2 k目前比较公认的观点认为“黑胶虫”是一种微生物，增殖缓慢但对细胞有损害，数量达到一定程度可引起细胞死亡，其来源可能是细胞本身的污染或从动物取材时污染造成的。该污染在全世界细胞实验室中普遍存在，解决该问题是一个世界性难题- K2 T4 t1 I; ^4 ^0 `
关于是什么的问题的讨论3 s, |0 Z+ \$ _( S  L4 Y
A.  玻璃培养瓶中的类似氧化硅的东西（曾经有文献报道过）
" l2 r' n; s- X6 H2 vB.  据说这是黑胶虫，又有人说是原生动物，好象也没个统一的说法
$ q2 P( p$ K3 G) D& wC.  据病毒所和军科院鉴定是一种寄生于牛血清内的一种原虫，似乎和草履虫和变形虫有类似之处，然而由于课题经费不够而不能继续进行下去。$ H. ~3 R! E# Y
D.  有人说是纳米级的细菌
- f3 Q* j8 m5 c, A其他的特点2 G3 ]% n( ^3 b: w; k% o- p8 }( S
（1）形态上有些像细菌，直径约在0.5~1微米，
# X" E. O) r$ n1 j5 O! n（2） 在400X倒置显微镜小，有典型的布朗运动（不规则的原地小距离抖动）。  z: m. Q. h4 U- W6 K2 q; c* B/ u
（3） 细胞内好像也有存在，: X; I  h2 ~* E2 {6 U! e
（4） 但并不引起培养液混浊8 C0 Q+ ^7 g* d" n/ u8 i
（5） 时间稍长，细胞状态明显恶化，并最后死亡
3 V% S: g. d" k3 c  t! v大家的处理：
& z3 L$ [' r$ k4 d1.换好一点的血清（我觉着和血清的关系不大）。3 {' U, v! H( D: A- p
2.如果是贴壁细胞的话，可用无菌的PBS洗几次，可一定程度上缓解。若是悬浮的话，就不太好处理拉，可以向其中少加一点滋养细胞（从小鼠腹腔内取的巨噬细胞，这种细胞不分裂，过一阵就死掉了，做抗体杂交瘤融合的同志肯定知道）。加滋养细胞对有黑胶虫的刚复苏的细胞很有效！还有就是实验环境要注意好，保持细胞间整个环境的洁净度。4 J7 v1 m- F4 u) Z: {: `6 W
3.换用进口的一次性塑料培养瓶。
# r$ @: U+ s4 C" u$ M+ @0 j4.建议清理无菌室所有物品，重新灭菌，用KMnO4熏蒸，按首次使用无菌室做，细胞重新复苏，。( U- d' P: H' U# @9 {; q( l" B$ y; z8 b
5. 在换液前先加入生理盐水并轻轻拍打，冲洗干净后再加入培养液，坚持天天洗，传代时加生理盐水再离心一次，接种密度稍大一些，一段时间后，虫子就会大大减少，对细胞的生长也不会有大的影响。9 t8 O  c) A' H% {2 P+ k+ l/ c
6.有材料称minocycline具有一定的作用，可以和换液结合起来使用。
. X1 w9 q% [9 `! ~以上是在网上看到材料，另外我还看到过如下的解释：1 s. k. h. _5 P/ j
黑胶虫即显微镜下观察到的“小黑点”，通常经过热处理的血清，沈淀物的形成会显著的增多。有些沉淀物在显微镜下观察像是“小黑点”，常会误认为血清遭受污染，也就是我们所认为的黑胶虫吧，而将血清放在37℃中欲培养此“微生物“，但在37℃环境下，又会使此沈淀物增多，更会误认为它在增殖，但以培养细菌的培养基检测，又没有污染。所以所谓的“黑胶虫”很有可能只是血清中的产生的沉淀物。
8 A: E, W, u3 Q2 b

刘慧瑾

这个确实是会越长越多，最后细胞无法生长下去

zhzliang

大多数情况下，就是由于操作不慎而交叉污染的带抗性的大肠肝菌，尤其是人多的实验室容易出现。霉菌污染的情况也有，但比较少见，因为生长速度较慢，短期内不容易判断，大都是实验室有人做酵母双杂交的时候会出现。也有单细胞原生动物污染的情况，那一般都是细胞自身带来的。

jxydiandian

不知道你是想问解决方法还是只是名词解释，如果你是做单纯的做科研，黑胶虫一般不会影响实验，如果你想做临床，最好灭活后使用，我们之前有一次只是做实验，没有灭活，出现过黑胶虫。

sc-cxw

从外周血或者脐血中分离单个核细胞时，分离结束在显微镜下观察，也经常会有黑胶虫。

sycdegcb

我养皮肤干细胞时碰上几次“黑胶虫”污染，第一天正常，第二天培养液会发黄，浑浊。400倍观察密密麻麻全是小虫子一样的东西。至于造成污染的原因我的经验是细胞材料没有处理干净，用加双抗的PBS多洗，我的皮肤块直接泡在酒精里，加上操作注意些基本可以避免。

仰天

以前培养细胞遇到过几次黑胶虫污染，如果发现的早用含双抗的PBS冲洗几次，细胞继续培养后镜下不会再有黑胶虫；不过发现的晚的话细胞就很难救回来了。现在培养细胞都是用含双抗的培养基，没有再发现污染。