请问那位前辈用悬浮培养的方法富集过癌细胞系中的CSCs？

lamp0521

如题，请问那位前辈用悬浮培养的方法富集过CSCs？具体方法是什么？效果怎么样？

superlamp

同问！

maiweiqian

同问，崩溃中

tiramisu

同问，最近也要用到这方面的知识

zz091115

细胞系很好养 DMEM/F12 基础培养基 2%B27 20ng/ml EGF 10ng/ml FGF2 可以对付大多数细胞系 如果有些特殊细胞系  再加点insulin就足够了 胃癌类的细胞系貌似有点小特殊 暂时不透露了 再细致的童鞋可以加1% glutamax 和HEPES缓冲液维持PH 加点glucose也可以  培养板用超低吸附的 corning有  六孔板每孔种个几千细胞就够了 别多了 多了最后球体就太多粘在一起了 每周换液两到三次 球体长到200um就足够传代了

maiweiqian

+ i0 L5 L) b* w% H# o# {- B* l+ i
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6 r: A# C' e  ^; H. M  i
7 ~' }8 I' B2 m- X; ?% R& Z想问您用的细胞系是？我就是用您说的这种方法提取细胞系的肿瘤干细胞，我每个六孔板的孔种10000个，我出现的问题就是您所说的，球体都粘在一起了。而且我的疑问是，那些球体到底是自发形成的还是我们当初种下去的细胞由于不规则运动而自发粘在一起的？我觉得似乎是后者。我种下去的细胞貌似没有增殖现象出现呢，很苦恼，您是离心换液？是怎么传代的呢？我的传代之后貌似就不活了，哎，各种麻烦。能和您交流一下么？

zz091115

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) d' y! q* f1 d. B- q" w6 X7 i' [* t1 L' t, @$ C
H460 A549 HCC827 MCF7 MB231 SUM159 MGC803我都做过 除了MCF7长得难看点 别的都非常圆 我做过单细胞成球实验 可以成球 一般细胞系一周成球差不多了 换液离心就可以了 传代的话 加胰酶一到两分钟消化为单细胞 重新接种 会再次成球 一个孔一万个细胞太多了

maiweiqian

回复 zz091115 的帖子$ Q# E5 Q, t/ j' b* X6 R
& q5 Q$ ?* g) E$ t1 {
看来是我种得太多了，我试试降低密度。你的细胞球会不会粘在一起啊？我试过吹散粘在一起的细胞，貌似不过多久，他们又再聚集在一起？单细胞成球的实验，我是打算稀释很多倍之后在96孔低吸附板上面做，您有没有什么好方法？问得有点多了，实在打扰您了。

zz091115

回复 maiweiqian 的帖子3 a4 r. M# [- C" S  y: T

9 f+ ?& l$ O( `3 K- `* U7 G降低种植密度 试试2000个 梯度稀释可以 也可以直接用流式单孔分选

maiweiqian

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' K* v; Z, c3 Q  `$ `  v4 s: O1 L" ?/ F2 u9 {
嗯嗯， 我试试看，谢谢您啊