关于酶消化法分离脐带间充质干细胞的消化时间问题

龟酱

% ?# f; J- X5 f$ ^% \

+ V1 h, {/ {2 H0 ?0 r9 o5 k" ^) K+ V看了很多帖子，大家的实验方法都不太一样啊. F! \3 O+ k) \! j2 @! ^. H
' ?+ A' ^/ i6 `4 K7 I/ q
有的前辈说用0.1%的胶原酶2消化4-6小时，有的说至少8小时
4 A7 T/ [7 }9 k, {, d% B: h而文献里说要0.1%胶原酶IV消化18小时
  @; Q. ~% Z( T5 S+ O下面这篇文献里又说用0.2%胶原酶2消化16~24小时：
9 ]- M2 R% H' q2 ]: b  r+ g" D7 {$ H
/ ]5 X% O- e! Z7 P3 thttp://wenku.baidu.com/view/2efbc2da7f1922791688e8e1.html5 z% {. ^' C# m

! R  U7 I7 U9 D: ^, ], A为什么差这么多呢？实际哪种效果比较好？求各位前辈指点，谢谢~

lidd14

不用消化那么长时间，块剪成0.5-1.5mm3，加入4型胶原酶1.0g/L,37℃恒温震荡培养箱3h,终止消化，用枪反复吹打，令细胞松散下来，用80目的过滤网过滤一下，将悬液离心洗涤一下就可以接种了，一般T75瓶接种1X106个细胞，你可以尝试组织块发，虽然细胞爬出的慢点，但是收集到的细胞要比酶消化法多。

龟酱

谢谢前辈回答，请问2型胶原酶和4型胶原酶区别在哪?- Y3 E3 H2 T' W& U5 {
一般实验用的细胞培养瓶是用T25、T50还是T75呢？

pcljsw2008

回复 lidd14 的帖子1 |+ \5 a2 N3 r; E" N3 y

. j5 w$ E5 [& I/ n$ W9 S/ }( K请问下你用的什么实际终止消化的

细胞海洋

回复 龟酱 的帖子
5 y$ ]9 \/ H/ s
; y/ K& j6 N2 \+ r4 c& e你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
) }2 Y4 h7 a7 i; O/ \7 w( {0 y: `, |5 Q% }2 Z- e) s. V$ S) [- T
否则他会看不到

龟酱

回复 lidd14 的帖子+ X- e  q/ y7 F& M' Q: j2 s- }

* \# i; N5 L0 \. s谢谢前辈回答，请问2型胶原酶和4型胶原酶区别在哪?
* t# V6 m1 [  Q, Q7 H8 G一般实验用的细胞培养瓶是用T25、T50还是T75呢？

龟酱

回复 细胞海洋 的帖子1 r' n6 ~+ ~& t7 q7 Y

9 z% f/ U+ u, g: o( t( W好的，谢谢

pcljsw2008

请教下我消化有的时候消化细胞很多，有时候消化下来没几个细胞，楼主有什么建议啊，曲曲折折的焦急

细胞海洋

回复 pcljsw2008 的帖子
  T2 Z5 G- R, D8 C" y. \) x8 P7 ]( j5 g. b# Q
建议你发新帖提问

ccst4838318

回复 龟酱 的帖子7 R0 \! E7 g! t
5 k& `, d- d6 v! C" F  u& ~: ^
实验室一般用的T75的瓶子较多