关于酶消化法分离脐带间充质干细胞的消化时间问题

龟酱

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看了很多帖子，大家的实验方法都不太一样啊' Y3 |) L: E7 z/ K# B% f4 \
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有的前辈说用0.1%的胶原酶2消化4-6小时，有的说至少8小时. i. k4 _. b. T% n$ y: a' E
而文献里说要0.1%胶原酶IV消化18小时
+ o# p. m( U! n# g. v( _) r/ F6 L下面这篇文献里又说用0.2%胶原酶2消化16~24小时：$ _* [3 m0 m  D9 x& ?$ P
  r4 Z; A. X4 C! r% E! n  m
http://wenku.baidu.com/view/2efbc2da7f1922791688e8e1.html
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为什么差这么多呢？实际哪种效果比较好？求各位前辈指点，谢谢~

lidd14

不用消化那么长时间，块剪成0.5-1.5mm3，加入4型胶原酶1.0g/L,37℃恒温震荡培养箱3h,终止消化，用枪反复吹打，令细胞松散下来，用80目的过滤网过滤一下，将悬液离心洗涤一下就可以接种了，一般T75瓶接种1X106个细胞，你可以尝试组织块发，虽然细胞爬出的慢点，但是收集到的细胞要比酶消化法多。

龟酱

谢谢前辈回答，请问2型胶原酶和4型胶原酶区别在哪?
3 j1 F& \* l6 h) _7 C2 D$ l3 t& C$ X一般实验用的细胞培养瓶是用T25、T50还是T75呢？

pcljsw2008

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6 o  O' ~" {, L" N0 a8 ~0 c/ [请问下你用的什么实际终止消化的

细胞海洋

回复 龟酱 的帖子2 a& S" _* n6 `8 r% T3 I

5 N$ a! i/ A: I/ o: o0 o你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
1 Q- Y1 i: F% S# S$ ]8 e4 |8 a- x6 ^* {+ i3 r3 g0 F
否则他会看不到

龟酱

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! G7 }% [; L8 S谢谢前辈回答，请问2型胶原酶和4型胶原酶区别在哪?! _4 ]0 ]3 r, K0 R7 e5 E
一般实验用的细胞培养瓶是用T25、T50还是T75呢？

龟酱

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好的，谢谢

pcljsw2008

请教下我消化有的时候消化细胞很多，有时候消化下来没几个细胞，楼主有什么建议啊，曲曲折折的焦急

细胞海洋

回复 pcljsw2008 的帖子1 M9 o; J% X* |' I% V$ a# g: t
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ccst4838318

回复 龟酱 的帖子6 N# a+ s) I) M2 H; [9 C% x$ ^/ h, c
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实验室一般用的T75的瓶子较多