人胚胎干细胞求助

Jonathan

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5 G5 ]; g* t- S
2 @' Y& E4 C! e- s5 C我在老裴那里，1.5M是for一个plate，通常是一个6-well plate
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hustdreamer

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) q6 Q3 ?0 ^5 D) m4 S0 f6 d  w: A8 \5 X4 a4 e# c
显微镜下找到分化的地方，用mark笔画上圈圈，用吸泵将分化的地方吸走；用枪吹打传代没什么问题。

ciweiyuan

建议酶消化的时间控制好，这样吹打后的效果好

nichifanlema2

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4ng/L

plainxie192

我们也是用的上面提到的feeder密度，养在培养瓶确实不好传代，建议你改用培养皿，这样就可以在体式镜下区分分化的细胞，传代时先用tip划出格子，再轻吹打起来，不会有泡泡的，注意力度。

shaozi402

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6 {( c) H+ U; d5 s# b( D
我们的H1，80%的时候传代比较合适，再密一些可能就会有部分分化

wuxiao101325

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* l9 q! G5 u& f8 H8 g( D关于feeder密度问题，这个主观性比较大，个人感觉传代时密度为85~90%为宜，复苏则再密一点，还是自己摸索适合自己的最佳条件最好；我们养ES一般用6cm皿，预coating geltin0.1%，方便操作，也不浪费培养基，除非需要扩大才换10cm皿；每天挑分化换液，我们是用200微升tip把分化克隆刮掉，这里的分化也很主观，我个人比较完美主义，只要是看到不像未分化的ES克隆的统统挑掉，换液时自然就去掉了；传代我们还是用tip锋利的边缘分割小，按自己能做到的程度尽量分割小，分割法按井字形分割即可，最后刮起来直接传代，这样传出来的ES克隆就可以保证大部分大小是均一的，如果开始不能割小，可以考虑转入15ml离心管，用1ml移液器吹打1~2次，切记不可过分吹打！！！