2014年 Nature scientific reports上的一篇关于“重组蛋白诱导iPSCs”的读后感

xray19

wanglimaomao 发表于 2014-4-1 17:02 4 R) B3 h3 z' F
我对蛋白重编程不是很了解。但是针对不能扩增传代有点想法。也不一定正确，欢迎批评指正。首先体外合成的蛋 ...

* H2 B$ C1 N. `$ L/ m  ^5 y: a即便将4个基因整合到基因组中，当细胞向ipsc转化过程中，外源表达的基因会逐渐被沉默的，直至最后完全沉默。与此同时，细胞内源性的干性基因会逐渐获得表达。

xray19

感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-5 23:06 : _% @4 t. Z. N; G
感谢楼主，我也提供一篇protein transduction induced ipsc 的文章，供大家讨论

+ D4 T& y4 I/ h: ?9 U7 _最好上传下文章！！！

xray19

  M( b0 M. Q, S( y% p' i不好意思，昨天没上传上去

Andyhigh

xray19 发表于 2014-4-6 11:56 5 K& A2 I+ ]' U% k5 L
不好意思，昨天没上传上去

3 Z7 m1 Z/ U; @! [您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！  y7 G" f* {: W" m* f5 {/ ~
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希望能起到抛砖引玉的作用。6 |. ^2 q; U( Q7 C& h( m! k$ p
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1. 刚打开文献，查了下杂志的IF，并以为是一篇用4因子（OSNL）诱导鸡体细胞重编程的文章，但看过摘要后发现自己错了，这是一篇”利用重组蛋白探索鸡ESCs 培养体系“的文章，文章具有较好的创新性，给了我一些启发，如在 用蛋白介导体细胞重编程后，是否可以利用重组蛋白 一直维持干细胞的多能性，甚至创建一种新物种ESCs的培养体系，值得尝试。
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2. 文章的思路: A. 用EGFP验证9R的功能； B. 国建pCMV-PF-9R-IRES-EGFP载体，瞬时转染293FT细胞，提取蛋白并浓缩； C. 加到鸡ESCs培养体系中，观察传代次数（一系列的检测指标），发现重组蛋白能抑制鸡ESCs的分化，能在体外维持ESCs的多能性2 Z; Y! Q0 j- R8 l; E
% j% W5 z8 x$ Z! R, Z4 y; ]3 f
3. 有一些疑问:  目前哪些物种获得了可以再体外长期传代的ESCs，求高手指教！！！另外文章中超声破碎细胞时的溶液是什么，还有转染效率怎么样（出现绿色的时间和比例，质粒应该没有线性化吧）这点自己比较感兴趣，希望Xray19能告知
4 y, `- }* I$ K2 C  V# |+ T
0 D* C2 \! D$ ^/ d6 ^2 g; Q6 G4. 文章整体比较简单，不过也是一个完整的Story，自己推测应该是一名研究生做的工作。顶一个
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xray19

回复 Andyhigh 的帖子+ |" s* g3 r6 M, G; _
  y' Y* B  E9 S/ r% h( g
楼主好厉害。我不是作者，把文章down下来一直在偷懒没有看，还搞错了文章内容，真的好惭愧。。。。
2 ~" J: f2 H9 w6 V3 x; p先不说话，赶紧看文章0 @6 _5 a  S( x* q' s
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xray19

Andyhigh 发表于 2014-4-6 15:17
' ^" i- c5 T3 x  w+ Z您是本文作者嘛，很希望您能对本篇文章进行总结和评价！# o! p; K9 e* `$ [
我刚大致看了下，这里与大家分享下我的看法，希 ...

) D* \5 F. B# n. B1 `. l/ D. p实在汗呐，下了文章后匆匆瞄了一眼摘要，跟Andyhigh一样，一开始也以为是用四因子蛋白诱导鸡细胞重编程的。大家都在热火火的用转导肽介导四因子造ipsc，这篇文章的作者反其道而行之，由此想到利用转导肽融合的干性因子去阻止鸡ESC在传代过程中多能性丢失，这是做ESC培养基研发的节奏啊。Andyhigh兄已经对文章评价的非常到位了，不多说了。9 A+ G6 e+ q3 B4 l  ?' h- W' B3 I
文中中超声破碎细胞的溶液应该是PBS吧（cells were washed twice with PBS and then ultrasonically disrupted），若有其它特殊的缓冲液应该会在方法中说明的。. B: m2 k! N8 d# T. b
293FT的转染效率，文章中也没说，但我利用lip2000转染过293FT（文章用的磷酸钙沉淀），效率超高，90%以上了，24小时的GFP几乎就全亮了，48小时达顶峰。2 c* j4 P# o3 b' L- k2 _( B  H
质粒线性化主要是为了稳定细胞系筛选时便于DNA片段插入基因组，瞬时表达时对转染效率和表达量并无助力，所以文章中估计没有线性化。* T- ?1 c0 r+ E5 O
人和小鼠的ESC是有可长期传代的细胞系的，这个大家估计都知道，置于其它的俺是小白，就不清楚了。倒是可以查下大鼠，果蝇，猪和牛是否有ESC细胞系。

Andyhigh

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. p, h1 ?8 S) S" g3 Y+ f大鼠的ESCs及培养体系有，猪ESCs也有，但是缺乏培养体系，其他的不太确定，估计绝大部分都没有公认的培养体系。

xray19

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9 s6 A9 E3 h0 o2 o
! _+ r( B) B  |) L) A9 x8 g权限不够，还加不了好友。有机会多就ips 聊聊