PBMC提取

Andyhigh

0 ~! J: v: @8 Z9 O8 i/ q

zhrt 发表于 2014-4-2 08:08
+ p. C% k- F: {# s: r  x回复 Andyhigh 的帖子2 Y& `# U  [5 h5 Q& Y1 |6 A+ p

& [) W0 E1 V9 L你提取的淋巴细胞怎么这么黄？我说的是红细胞的上表层贴着红细胞的表面有絮状物，有 ...

% d& q: R3 r; W; u  Y3 L" i/ S
- K9 J$ P. P2 W
本来是红色的，手机拍完就变成这样了；今天又做了一次，再上传张图片瞧瞧。
) H6 d: p: l+ H7 _
7 ?' X+ Y! d  `6 O0 k你说的可能是脾脏压碎后的组织碎片，细胞碎片，或者老化的淋巴细胞之类的混合物！

Andyhigh

. o9 W* {7 j5 q% i. A/ P/ E

490096812 发表于 2014-4-2 08:40
- `; h0 f3 Q9 h0 U大神，你用的什么基质啊

! Z1 l- l. z* Y  X" |  @
; l' z/ s* {4 P9 f' T$ P: a& tPercoll，最近看着有一篇文章说的PBMC的提取，不过用的不是这种基质！
1 W. O! k7 ^1 ~3 r) t" e: z9 D5 C' K( ?% u1 @6 f; k) ?
你可以参考本论坛的另一个帖子，有我的评论; T4 z, ^% k! m, |+ M% j
链接 http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... t-%D6%B8%BC%E2.html

Andyhigh

回复 momoenn 的帖子
, s, k7 ~( |: e3 N2 Q% Z! k& {7 K; |/ l: O' V# B* J0 Z' P
中间的白膜层是红细胞和淋巴细胞的混合物，此时还没有用红细胞裂解液裂解；1 @# I) A) B+ r/ H1 y6 w( |; t
最上层的液体是自己加的1ml细胞培养液，根据自己的经验，这样离心的效果会更好点！！！
0 V  M, t2 K! w( R8 w# k3 L% D

Andyhigh

回复 aochongyu 的帖子. P3 P! D/ k% x* c9 H$ ]4 U; E
5 W) g% ~. Y2 u. }& A8 y7 i! L! R6 W
自己加的1ml细胞培养液，这样做的目的是离心效果更好！

Andyhigh

回复 momoenn 的帖子) ~- N+ q+ S" [) _" ]  L5 r2 t
/ c: v4 A# r0 D4 S
用密度梯度离心，我知道的情况是离心机的升降加速度都必须为0啊，且此时离心为室温，不然后影响分离结果，而洗细胞 和操作时，最好在冰上操作，以保持细胞的活性！！！

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子
3 p: b, D+ G9 n' l; v. l
/ C' I1 g1 o/ _: u, F升降加速度最小是1吧？但是那样太慢了，可以做实验找一个最合适的加速度的。

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子
! I* _" G0 y! d5 V! o
0 Z+ c5 A( b7 a% D1 t奥，你用的percoll，那就不了解情况了。我们用ficoll，白膜层没有出现过红细胞呢

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子
" C2 q$ z' H! g" W$ N4 Y& n; M$ ?7 R( F; L2 p# r' a6 m7 D/ R
奥，这样啊。因为你用的percoll，不了解情况。我们用ficoll，白膜层没有混杂过红细胞。说一下我自己的分析哈，探讨一下，因为percoll和ficoll分离都是密度梯度离心法，红细胞和淋巴细胞密度不一样，不应该在同一层啊。

zhrt

回复 Andyhigh 的帖子/ Y% y5 {4 ?: O1 b4 i: w
8 ]! L0 K$ w4 j
亲，我做的是用外周血培养cik啊

zhrt

回复 momoenn 的帖子$ V9 s& z1 g+ Y( r& h8 w3 ?6 V
  m' Q% V0 g4 H
我们也是用ficoll白膜层