PBMC提取

Andyhigh

3 o. t) S7 L) M/ @9 r

zhrt 发表于 2014-4-2 08:08 4 A+ t6 j7 T/ ~
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0 K' u6 c' `- k, g
( U7 {' z8 Y- Z0 Y, H8 X你提取的淋巴细胞怎么这么黄？我说的是红细胞的上表层贴着红细胞的表面有絮状物，有 ...

# b( c, \" b0 i) c5 }; k  w0 [

8 e) i0 c) m6 U; P/ x" `. F& k, k* W, `本来是红色的，手机拍完就变成这样了；今天又做了一次，再上传张图片瞧瞧。
) q! D5 g6 ?' f7 }4 P& G+ B0 Z5 B1 b, R
你说的可能是脾脏压碎后的组织碎片，细胞碎片，或者老化的淋巴细胞之类的混合物！

Andyhigh

: K: K8 f- O5 T& Z0 R

490096812 发表于 2014-4-2 08:40 & S1 d$ K5 k: x9 c
大神，你用的什么基质啊

1 L, j1 C1 d  m3 Z) b: c# H! A* H. p
Percoll，最近看着有一篇文章说的PBMC的提取，不过用的不是这种基质！
, W0 p+ r% J. ^4 O' J
/ S# J& s! B7 ^0 }* K2 `1 }* K你可以参考本论坛的另一个帖子，有我的评论
! K% x3 b6 X+ m: O5 Z3 Z) d链接 http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... t-%D6%B8%BC%E2.html

Andyhigh

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' y& y6 j2 ^% H/ E6 x( \9 }9 p; ?& ^4 o5 N2 T
中间的白膜层是红细胞和淋巴细胞的混合物，此时还没有用红细胞裂解液裂解；
. l- g9 M. e: [3 V最上层的液体是自己加的1ml细胞培养液，根据自己的经验，这样离心的效果会更好点！！！. n4 `1 Z: E/ h+ A8 g: b. k; V# z# U

Andyhigh

回复 aochongyu 的帖子: P* [5 x# I9 J7 d( r  o
" V3 T! q% u! Y' s% q
自己加的1ml细胞培养液，这样做的目的是离心效果更好！

Andyhigh

回复 momoenn 的帖子9 @  o3 N$ m$ g- O

' J7 O' I# _+ I1 W. @' E. G用密度梯度离心，我知道的情况是离心机的升降加速度都必须为0啊，且此时离心为室温，不然后影响分离结果，而洗细胞 和操作时，最好在冰上操作，以保持细胞的活性！！！

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子% k& {" B7 ^  a& z+ V
% F/ H# b4 D& D+ {3 M- l
升降加速度最小是1吧？但是那样太慢了，可以做实验找一个最合适的加速度的。

momoenn

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) w! e2 z3 H8 U) }# x
6 Q9 o. a/ X& _0 f! S9 K奥，你用的percoll，那就不了解情况了。我们用ficoll，白膜层没有出现过红细胞呢

momoenn

回复 Andyhigh 的帖子4 O6 q% W0 @. z, f

. d8 f# f4 M) y( O- P6 O" c奥，这样啊。因为你用的percoll，不了解情况。我们用ficoll，白膜层没有混杂过红细胞。说一下我自己的分析哈，探讨一下，因为percoll和ficoll分离都是密度梯度离心法，红细胞和淋巴细胞密度不一样，不应该在同一层啊。

zhrt

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: w1 N% q# B2 T- j% f# \! o% L
7 J/ R/ O- i/ u7 a亲，我做的是用外周血培养cik啊

zhrt

回复 momoenn 的帖子5 F# b9 M' F8 [" y8 V
6 z7 [- a" X0 z" y' W
我们也是用ficoll白膜层