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本帖最后由 石山巨石 于 2014-4-2 10:55 编辑 . Y! a, v+ q# n. l" J
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细菌内毒素一般会污染 细菌做载体的质粒DNA扩增产物 或者工业级别生产的蛋白质 （根据下游做什么 以下几点可省略 如果下游非常敏感 就稍微多注意一下）0 O: s) p" W1 f3 I* Z) u1 R# W
我们公司有配方去除内毒素 但是不是很方便
5 f1 O) b0 i8 h# f' Y7 z不过 我可以提供一些思路 供大家参考 以及一些降低内毒素污染的操作细节* c1 j3 r6 N; h! Y+ u2 H
1， 内毒素为细胞壁内脂多糖 在细菌裂解后大量释放于环境中 因此 细菌培养（伴随细菌死亡） 细菌离心（有条件 除内毒后的步骤换离心机 没有就用HCLO 酒精擦擦） 以及“细胞裂解”过程的房间 最好能和过柱子的房间分开, F% A7 ]" p8 A
2， 细菌裂解液的容器 和后续的一定不能混 一定要换新的
0 e* Y9 P0 i: W0 a7 _3， 即使如此 空气中还是大量存在内毒素的（可以 做对照试验elisa测，一个水有盖，一个无盖，过夜，elisa）过柱子的时候如果有条件在超净工作台（后续步骤 需要另外换一个超净台） 或者无菌室做就在无菌室做 没有条件 应该尽量避免空气流动 （比如这个时候 扫地 吸尘器 开空调） 虽然不开空调会很热 Y( {5 [2 l L3 R7 {* ?& s/ v5 m
4， 过柱子之后洗涤过程 以及所有后续步骤的tips 容器 一定要事先elisa 测量 并且在超净台内进行 即使同一个厂家生产的东西 由于batch不一样 质量差异也会很大（我们公司被坑过几次，不过也看情况 有的可以接受 有的不行）4 A) {* p, c0 k! A. i- P
5，使用的时候也要注意保持tips 离心管等洁净（事实上 保持器材洁净要比防止试验污染还要重要 器材脏了毁一堆试验 所以 我的东西是不能让别人用的 别人用了 我不放心 就会换新的） 保持洁净 不是去擦拭 而是防止被污染 （擦拭 有时候会更脏）8 w3 f3 p5 H$ M, g: E% i) r" s% p
6， 关于内毒素的去除， 脂多糖为疏水性分子 质粒DNA带负电 所以在污染/产率要求不高的时候 可以多用酒精洗
. R1 |. M: W* o& L+ X 如果样品少或者要求特别干净 用类似于肥皂的detergent （不是真的肥皂）不过要注意过柱子之后的酒精洗涤 浓度不能太高（容易污染） 也不能太低（去不干净） 避免污染样品
6 t# |: L U! t. X0 z7， 如果要用自己配的BUFFER， 一定要事先测量内毒含量，如果存放时间久，要定期测量，注意密封
, H5 L9 d! ?2 |1 u8， 水。 水是最容易脏的，买来的机器净化 也不能完全相信，一定要定期检测，更换指定部件。买来的净化水也是需要测量的。 （除非你买医用蒸馏水，不过我们公司在转存医用蒸馏水之后 还是会测一下的）
! l; G( o9 v, r' S" ]2 B, d/ S9， 祝大家实验顺利 早日毕业。& d, H( A$ l6 u$ }5 j3 N# P
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发表于 2014-4-2 10:45
