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本帖最后由 石山巨石 于 2014-4-2 10:55 编辑
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U1 s& \8 p3 n8 Q" P4 |8 Q细菌内毒素一般会污染 细菌做载体的质粒DNA扩增产物 或者工业级别生产的蛋白质 （根据下游做什么 以下几点可省略 如果下游非常敏感 就稍微多注意一下）
/ F# ]9 C5 B# O5 M; h我们公司有配方去除内毒素 但是不是很方便2 W* U6 o, D6 v, W. W# v: L p" S
不过 我可以提供一些思路 供大家参考 以及一些降低内毒素污染的操作细节( [' j2 ~8 t8 S& B; F# N/ w- }
1， 内毒素为细胞壁内脂多糖 在细菌裂解后大量释放于环境中 因此 细菌培养（伴随细菌死亡） 细菌离心（有条件 除内毒后的步骤换离心机 没有就用HCLO 酒精擦擦） 以及“细胞裂解”过程的房间 最好能和过柱子的房间分开/ X5 A. ]( f6 E$ \& s
2， 细菌裂解液的容器 和后续的一定不能混 一定要换新的1 J3 R$ |+ o, U
3， 即使如此 空气中还是大量存在内毒素的（可以 做对照试验elisa测，一个水有盖，一个无盖，过夜，elisa）过柱子的时候如果有条件在超净工作台（后续步骤 需要另外换一个超净台） 或者无菌室做就在无菌室做 没有条件 应该尽量避免空气流动 （比如这个时候 扫地 吸尘器 开空调） 虽然不开空调会很热
, W5 g" y0 E0 R5 z4 ?% Q Y4， 过柱子之后洗涤过程 以及所有后续步骤的tips 容器 一定要事先elisa 测量 并且在超净台内进行 即使同一个厂家生产的东西 由于batch不一样 质量差异也会很大（我们公司被坑过几次，不过也看情况 有的可以接受 有的不行）. ~. d! N" G4 Q% T
5，使用的时候也要注意保持tips 离心管等洁净（事实上 保持器材洁净要比防止试验污染还要重要 器材脏了毁一堆试验 所以 我的东西是不能让别人用的 别人用了 我不放心 就会换新的） 保持洁净 不是去擦拭 而是防止被污染 （擦拭 有时候会更脏）+ |, Y) B: |" L1 D3 n
6， 关于内毒素的去除， 脂多糖为疏水性分子 质粒DNA带负电 所以在污染/产率要求不高的时候 可以多用酒精洗$ f3 z1 t8 o5 u, K
如果样品少或者要求特别干净 用类似于肥皂的detergent （不是真的肥皂）不过要注意过柱子之后的酒精洗涤 浓度不能太高（容易污染） 也不能太低（去不干净） 避免污染样品3 B0 ?# @" ], R( ~
7， 如果要用自己配的BUFFER， 一定要事先测量内毒含量，如果存放时间久，要定期测量，注意密封' @# [9 }0 ]( Y f4 o1 K! z# G7 `) O
8， 水。 水是最容易脏的，买来的机器净化 也不能完全相信，一定要定期检测，更换指定部件。买来的净化水也是需要测量的。 （除非你买医用蒸馏水，不过我们公司在转存医用蒸馏水之后 还是会测一下的）" z3 @/ I8 V5 {: U% I
9， 祝大家实验顺利 早日毕业。; h1 M$ v b( Q' Z% v6 j
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发表于 2014-4-2 10:45
